[发明专利]一种用于胚胎植入前染色体异常检测的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于胚胎植入前染色体异常检测的方法，具体的，通过改进单细胞扩增方法，优化传统的文库构建的步骤，提高检测准确度，降低了染色体核型和CNV的假阳性率。

主权项

一种用于胚胎植入前染色体异常检测的方法，该方法包括：步骤A：将样本细胞进行细胞裂解，获得裂解产物；步骤B：将裂解产物进行预扩增，获得预扩增产物；步骤C：将预扩增产物进行PCR扩增，纯化，获得扩增DNA片段；步骤D：利用dsDNA Fragmentase对扩增的DNA片段进行打断，纯化，获得打断的DNA片段；步骤E：将所述打断的DNA片段进行末段修复，纯化，得到平末端DNA片段；步骤F：将所述平末端DNA片段进行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；步骤G：将所述3'端加A的DNA片段进行加接头，纯化，得到加接头的DNA片段；步骤H：将所述加接头的DNA片段进行PCR扩增，纯化，得到扩增产物；其中，步骤A中所述裂解反应条件为50℃30分钟，99℃4分钟，4℃保存；步骤C中所述PCR扩增的反应条件为95℃3分钟，(94℃30秒，65℃5分钟)19个循环，4℃保存；步骤E中所述末端修复使用试剂包括：1μL T4 DNA聚合酶，1μL T4多聚核苷酸激酶、1μL Klenow片段、5μL 10×多聚核苷酸激酶缓冲液及1μL dNTP；步骤F中所述3'端加A使用试剂包括：0.5μL Klenow片段(3'‑5'exo‑)、2.5μL dATP及2.5μL 10×缓冲液；步骤G中所述加接头使用试剂包括：1μL T4 DNA连接酶，25μL T4 DNA连接酶缓冲液，1μL接头；步骤H中所述PCR扩增的扩增引物包括：Ann引物序列(SEQ ID NO:1)：5'‑AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGAC‑3'Index引物序列(SEQ ID NO:2)：5'‑CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATANNNNNNNGTGACTGGAGTTC‑3'；其中，N为随机碱基。