[发明专利]一种奶牛与黄牛异种体外受精胚胎的制备方法有效
| 申请号： | 201710667052.8 | 申请日： | 2017-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN107365738B | 公开（公告）日： | 2020-02-14 |
| 发明（设计）人： | 张立苹;林郑云;郑新民;毕延震;华再东;曹辉;刘西梅;肖红卫;华文君;李莉 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 42222 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 430064 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种奶牛与黄牛体外受精胚胎的制备方法。方法中采用屠宰场废弃的奶牛卵巢，经过温度递增式的生理盐水梯度洗涤，抽取其中的卵母细胞进行体外成熟培养，获得高质量的体外成熟培养的卵母细胞；高产奶牛精子解冻后置入受精液中用移液枪轻轻吹打后，上下颠倒几次，于培养箱中上浮，进行体外受精，制备高产奶牛与黄牛体外受精胚胎。本发明采用屠宰场废弃的卵巢获得卵母细胞，提高了母牛资源的利用率。并且通过技术细节的改进，获得了较好的效果。利用本发明能够大幅度提高优良种公畜的利用率，使优良种公畜获得大量的后代，从而扩大其在畜群遗传改良中的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 卵母细胞 体外成熟培养 体外受精胚胎 卵巢 高产奶牛 屠宰场 制备 黄牛 废弃 奶牛 技术细节 生理盐水 体外受精 温度递增 遗传改良 培养箱 移液枪 吹打 精液 后置 精子 母牛 上浮 解冻 洗涤 颠倒 抽取 后代 改进 | ||
【主权项】：
1.一种奶牛与黄牛异种体外受精胚胎的制备方法，其步骤为：/n（1）将屠宰场采集的黄牛卵巢放入添加双抗的25℃灭菌生理盐水中恒温保存7h内带回实验室，依次用30℃、35℃无菌生理盐水洗涤，分别洗涤2次后置37℃水浴锅中备用，10毫升一次性注射器抽吸法获取卵丘-卵母细胞复合体（COCs）；/n（2）将捡取的卵丘-卵母细胞复合体（COCs）用提前2h于39℃水浴锅中预热的含有5%胎牛血清（FBS）的DPBS缓冲液洗涤3次，再用提前2h于39℃培养箱中预热的体外成熟培养液洗涤3次后置于CO
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