[发明专利]利用数字PCR鉴定B淋巴细胞的Ig基因分布的方法在审
| 申请号： | 201710669647.7 | 申请日： | 2017-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN107312863A | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 林莉娅;武靖华 | 申请（专利权）人： | 深圳华大基因研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅,张立娜 |
| 地址： | 518083 广东省深圳市盐*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用数字PCR鉴定B淋巴细胞的Ig基因分布的方法。该方法包括1)根据5种Ig重链C区设计五套引物，每套引物中包含反转录引物、扩增引物和/或taqman探针；反转录引物与增引物中的下游引物相同；2)同一待测样本等量的5份RNA，反转录成cDNA后进行数字PCR检测，获得5份cDNA中相应Ig基因的原始拷贝数，计算待测样本中5种Ig基因的拷贝数分布。本发明方法可鉴定五种Ig基因的表达情况且不存在偏好性问题，可反应原始样本五种Ig的比例。本发明用数字PCR技术鉴定Ig基因分布可验证测序结果是否存在偏好性，利于引物扩增偏好性的纠正。Ig比例的准确性有助于疾病免疫反应、疫苗评估等研究。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 数字 pcr 鉴定 淋巴细胞 ig 基因 分布 方法 | ||
【主权项】：
一种利用数字PCR鉴定B淋巴细胞的5种Ig的C区基因的拷贝数分布的方法，包括如下步骤：(A1)根据5种Ig的C区基因序列设计五套引物，每套引物中包含反转录引物、用于扩增C区基因的扩增引物和taqman探针；(A2)取来自同一个受检者等量的5份RNA作为待测样本，每份RNA对应一套引物，采用所述反转录引物将所述RNA反转录成cDNA；采用所述扩增引物和所述taqman探针对所述cDNA做数字PCR检测，从而获得5份cDNA样本中相应Ig的C区基因的原始拷贝数，进而计算所述受检者B淋巴细胞的5种Ig的C区基因的拷贝数分布。
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