[发明专利]基因敲除方法在审
| 申请号： | 201710672040.4 | 申请日： | 2017-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN109385421A | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 魏文胜;陈一欧;周悦欣;张鸿敏;袁鹏飞;刘源 | 申请（专利权）人： | 北京大学;博雅缉因（北京）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙) 11535 | 代理人： | 刘元霞 |
| 地址： | 100871 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及通用供体构建体，以及基因敲除方法及其系统和试剂盒。本发明的基因敲除方法通过非同源末端连接将通用供体构建体中包含的标记物基因插入到细胞基因组中的双链断裂位置上，通过表达的标记物富集基因被敲除的细胞，提高了通过序列特异性核酸酶产生基因敲除的效率。本发明的通用供体构建体包含通用线性供体DNA，所述通用线性供体DNA上包含可以被序列特异性核酸酶切割的通用靶序列，该通用靶序列在待进行基因敲除的细胞的基因组中不存在，因此，在进行基因敲除时，无需专门构建配套使用的线性供体DNA，直接使用通用线性供体DNA和靶向该通用线性供体DNA的gRNA即可。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除 供体DNA 通用线性 通用 构建体 供体 序列特异性核酸酶 靶序列 非同源末端连接 标记物基因 细胞基因组 细胞 双链断裂 标记物 基因组 试剂盒 靶向 富集 构建 敲除 切割 基因 | ||
【主权项】：
1.通用供体构建体，所述通用供体构建体是线性供体DNA或可在细胞中被切割产生线性供体DNA，所述线性供体DNA由中间向两端依次包含：表达盒；位于表达盒5'端的由反向终止密码子组成的短的序列延伸和位于表达盒3'端的由正向终止密码子组成的短的序列延伸；位于5'端和/或3'端的通用靶序列，所述通用靶序列含有可被Cas9核酸酶切割的靶位点；位于两端的保护序列；其中所述表达盒包含由启动子驱动的标记物基因；其中所述通用靶序列在待进行基因敲除的细胞的基因组中不存在。
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