[发明专利]一种富含SOD的辣木种植方法

摘要

本发明公开了一种富含SOD的辣木种植方法，包括辣木组织培养、组培苗移栽管理、大田移栽、栽培管理、病虫防治及定型修剪、整枝及采摘；同时辣木叶采用超微粉碎破壁技术加工成辣木粉，辣木粉与木瓜、刺梨、红糖混合进行发酵，获得SOD增量肥III，最后阶段喷施SOD增量肥III进一步的促进了辣木的生长，确保辣木富含SOD。本发明根据辣木组培过程及各个生长期的生长特点，通过施用不同的SOD肥料，以促使辣木生长过程中SOD的合成，最终获得高含量SOD辣木。采用本发明种植方法得到的辣木粉中SOD的活性达到200U/mg以上。

主权项

1.一种富含SOD的辣木种植方法，其特征在于，包括以下的步骤：(1)辣木组织培养a、外植体的选择和处理：选择均匀、饱满的一年生辣木种子作为外植体，然后去除质白翼，剥壳，依次用70～75％乙醇溶液处理30～50s，0.08～0.12％升汞溶液处理8～18min，之后无菌水冲洗2遍以上；b、种子发芽培养：将处理过的种子接种于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，在25～28℃温度下进行发芽培育；c、不定芽诱导培养：当种子萌发后无菌苗长到3～5cm时，切去根及子叶，保留上胚轴作为不定芽材料，以改良MS+0.4～0.8mg/L 6‑BA+0.04～0.08mg/L NAA为培养基，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行不定芽诱导培养；d、继代增殖分化培养：将不定芽切成1～3cm长的茎段，接入于改良MS培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，加入0.1～0.3mg/L 6‑BA和0.01～0.03mg/L NAA，调节PH5.8，进行继代增殖分化培养；e、生根培养：将继代增殖分化培养的3～5cm健壮丛生芽接种到改良MS+0.4～0.8mg/L IAA+0.1～0.3mg/L NAA生根培养基上，培养基添加2.0～6.0g/L SOD增量剂、2.0～3.0g/L琼脂和20g/L蔗糖，调节PH5.8，进行生根培养至生根，出根20天后及时从培养基中移栽出来；所述改良MS是将MS中的大量元素含量降低1/2，微量元素含量增加2倍；(2)组培苗移栽管理：将已生根的组培苗移至室外练苗3～5天，于温室大棚内移栽到栽培基质中，栽培基质由河沙、珍珠岩、腐熟的辣木叶、泥炭土组成；(3)大田移栽：在苗长到19～22cm高时开始大田移栽及定植；选择有灌溉条件、排水优良、弱酸性至中性的沙壤土或壤土；种植前先搞通排灌水，平地起畦，山地开成梯田，每畦种植两排，每亩定植700～900株，挖穴深35～45cm，每穴下500g腐熟农家肥作为底肥，种植后回填土略斜压实；(4)栽培管理：在幼苗种植后的前一个月定期浇水，保持土壤适度湿润，定植一个月后，若有自然降雨，即可不再浇水，在干旱季节适当灌溉，在种植期间，不除草；当辣木苗长高至30～40cm时，喷施SOD增量肥I号；所述SOD增量肥I号包括EDTA络合锌6～30份、EDTA络合锰6～30份、EDTA络合铜6～30份、EDTA络合钼3～5份、EDTA络合镍3～5份、EDTA络合钛3～5份；(5)病虫防治：采用物理防治和生物防治联合使用；(6)定型修剪、整枝及施肥：a、辣木树高度在1.5～1.8m，主茎直径达2.0～3.0cm时，离地60cm处截干，培养3～4个一级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；b、当一级分枝长到15～25cm时，喷施SOD增量肥II号；所述SOD增量肥II号包括氨基酸络合锌6～30份、氨基酸络合锰6～30份、氨基酸络合铜6～30份、氨基酸络合钼3～5份、氨基酸络合镍3～5份、氨基酸络合钛3～5份；c、当一级分枝长到60cm、直径达≥2.0cm时，在离分枝处30cm高处再次截干，待二级分枝长至40～60cm时，进行摘心断顶，每个一级分枝上选留3～4个二级分枝；收集截干时废弃的辣木叶，备用；(7)每经过10～20天，当二级分枝上的嫩牙生长至30～40cm时，便可采摘10～15cm长的嫩枝叶；(8)每次采摘鲜叶后的第三天，对辣木树喷施SOD增量肥III；所述SOD增量肥III是由以下方法制备获得：a、破碎：将新鲜成熟木瓜、刺梨进行破碎；b、辣木粉的制备：将两次截干时废弃的辣木叶经自然晾晒或60℃以下低温干燥，控制水分≤8.0％，然后采用超微粉碎进行破壁粉碎，过300～900目筛；c、装发酵罐：将50～80份水、0.5～10份红糖、1～20份木瓜，1～20份刺梨、5～10份辣木粉，装在发酵罐中搅拌均匀，密封；d、发酵：于25～28℃温度发酵，发酵过程中，每天打开顶部阀门放气10～20分钟，发酵2～4个月，过滤，获得SOD增量肥III；所述SOD增量剂，是由以下方法制备获得：a、按重量比1：1称取新鲜成熟木瓜和刺梨，清洗后粉碎打桨，加入重量4倍的PH值6.8、浓度为100mmol/L、含5mol/L EDTA和20mmol/L焦亚硫酸钠的磷酸氢二钠‑磷酸二氢钾缓冲液，在常温下不断搅拌，浸提2小时，150目过滤，滤液经连续离心30min，获得上清液，用HCl调整其PH值至5.0，常温下静置30min后，经连续离心30min，收集沉淀物，加入4倍重量的去离子水，搅拌溶解，得粗品溶液；b、粗品溶液加热至45℃，用NaOH溶液调整PH值至9.0，滴加粗品溶液总质量0.02％的修饰保护剂月桂酰氯，不断搅拌，保温并维持粗酶液PH 9.0不变，反应1小时后，快速冷却至30℃以下，离心去除沉淀物杂质，收集上清液，用HCl调整PH值至6.5，快速升温至65℃，不断搅拌，保温反应10分钟后，快速冷却至30℃以下，离心10min，收集上清液，得精品溶液；c、精品溶液加入其体积1.5倍的4℃以下预冷过的95％乙醇，边加边缓慢搅拌，于0～4℃下静置10分钟后，离心10min，收集SOD精品沉淀，冷冻干燥，得SOD增量剂。