[发明专利]一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法

摘要

本发明提出一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法，采用淀粉凝固体制备、覆膜、毒素收集、酶解、离心、镍柱层析、超滤除杂的方法，获得箱形水母蛋白类毒素粗纯液。与现有技术相比，本发明的有益效果是：操作时，操作人员不直接接触箱形水母，保证人员安全；只对箱形水母刺丝囊及其毒性物质进行采集，对水母损害小，其再生时间短，仅需2天，生产可持续性极具优势，为未来工业化利用水母毒素提供了条件；使用酶法分解淀粉凝固体时间较水母自溶时间更短，利于缩短生产时间；收集的刺丝囊及其毒素，受外界蛋白污染可能性小，初步纯化分离出的蛋白仅为水母毒素蛋白，为后续进一步纯化创造良好的基础。

主权项

一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法，其特征如下：a)淀粉凝固体制备：淀粉20～30%（w/w），增稠剂0～20%（w/w），纯化水补齐至100%（w/w），加热煮沸，期间不停搅拌，待无沉淀时，停止加热，入模（模底铺设尼龙纱网）晾至室温，即为淀粉凝固体；b)覆网：在淀粉凝固体未完全凝固时，外测使用尼龙纱网固定，以增加淀粉凝固体的抗破损性能；c)毒素收集：使用覆网淀粉凝固体模仿水母食物，接近箱形水母，诱导水母对其进行防御和捕猎，等待一段时间后回收覆网淀粉凝固体；d)酶解：对回收的覆网淀粉凝固体进行解剖，取外层厚度1～5mm淀粉凝固体压碎，使用组氨酸修饰的淀粉酶，于20～35℃进行酶解，加入一定量的纯化水，酶解至无大块淀粉固体残留时停止，获得酶解液；e)离心：保持4℃，对酶解液进行离心，以除去未酶解的残渣，保留离心上清液；f)镍柱层析：保持4℃，将上清液进行循环上样于镍柱层析柱，保留最终的滤出液，除去淀粉酶，最后洗脱层析柱回收淀粉酶；g)超滤除杂：保持4℃，使用截留量为1kD的水性膜对步骤f）中的滤出液进行超滤，除去盐、葡萄糖等小分子杂质，并对水母毒素进行浓缩，保留超滤液即为水母毒素粗纯液。