[发明专利]一种细胞活性因子凝胶的制备方法及在美容抗衰中的应用

摘要

本发明涉及一种细胞活性因子凝胶的制备方法包括以下步骤(1)活性因子悬液的制备(2)活性因子分离纯化(3)干细胞活性因子凝胶的配制，本发明采用能抑菌的高分子材料提取的干细胞分泌活性因子不需要进一步纯化可直接使用，方法简单实用，避免了间充质干细胞分泌因子提取的繁琐步骤；配方中不含动物源血清，防腐剂；凝胶制备后采用低温保存方式，可以有充足的时间进行放行检验，满足药典法微生物检测、支原体检测的时间要求，保证了制品质量。

主权项

一种细胞活性因子凝胶的制备方法：包括以下步骤：(1)活性因子悬液的制备：从脐带、脂肪、胎盘分离、纯化所述间充质干细胞，使用含10％胎牛血清的DMEM或DF12培养基常规培养，待细胞融合度达80‑90％时，用胰蛋白酶消化，使用上述完全培养基进行中止，离心收集细胞，再用无血清DMEM或DF12培养基悬浮细胞沉淀，调整细胞浓度传代培养，收集15代以内的培养上清，离心除掉不溶性杂质和变性蛋白，取上清液用于活性因子的分离纯化；(2)活性因子分离纯化：将上清液与1～10g/L壳聚糖溶液10:1‑20:1混合，调节pH值，然后置于摇床中振摇，离心，沉淀经弱碱性水溶液洗涤溶解；(3)干细胞活性因子凝胶的配制：在上述活性因子浓缩液逐滴添加保湿剂，边添加，边进行混合，所述保湿剂剂与活性因子悬液的体积比为1∶2；混合均匀后，放到‑20℃冰箱中冻存待用。