[发明专利]一种水稻A、B型淀粉粒分离纯化方法

摘要

本发明为一种水稻A、B型淀粉粒分离纯化方法，该方法有A、B型淀粉粒纯度高，操作简便可行性高的优点。一种水稻A、B型淀粉粒分离纯化方法，包括(1)清洗浸泡后的水稻籽粒胚乳，加水研磨后离心，得水稻总淀粉粒沉淀；将水稻总淀粉粒沉淀用氯化铯溶液洗涤后，依次用wash buffer、水和乙醇溶液离心洗涤，再风干，得水稻总淀粉粒；(2)向水稻总淀粉粒中加水并使之悬浮后，再平铺在细胞分离液表面，离心分层，上层为B型淀粉粒悬浮液，下层为A型淀粉粒沉淀；将B型淀粉粒悬浮液离心，得B型淀粉粒沉淀；用细胞分离液洗涤A、B型淀粉粒沉淀，得A、B型淀粉粒粗品；将A、B型淀粉粒粗品依次用水和乙醇溶液离心洗涤，再风干，得A、B型淀粉粒。

主权项

一种水稻A、B型淀粉粒分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备水稻总淀粉粒：在3‑5℃的温度下，将水稻籽粒浸泡在质量分数为0.8‑1.2％的氢氧化钠溶液46‑50小时后，去除种皮，取出胚乳，用水清洗胚乳2‑3次，得水稻籽粒胚乳；向水稻籽粒胚乳中加水，并研磨10‑12分钟，得研磨液；将研磨液在4000‑6000g的离心力下离心4‑6分钟后，研磨液分层，上层为上清液，下层为沉淀物，收集沉淀物，得水稻总淀粉粒沉淀；用氯化铯溶液洗涤水稻总淀粉粒沉淀3‑4次，得水稻总淀粉粒粗品；所述用氯化铯溶液洗涤水稻总淀粉粒沉淀指：向水稻总淀粉粒沉淀中加入水，使水稻总淀粉粒沉淀悬浮后，加入氯化铯溶液，再离心；所述氯化铯溶液中：氯化铯的质量与氯化铯溶液的体积比为8‑12g：100ml；将水稻总淀粉粒粗品先用wash buffer离心洗涤2‑3次，再用水离心洗涤2‑3次，之后再用体积分数为70‑80％的乙醇溶液离心洗涤2‑3次，得水稻总淀粉粒湿品；风干水稻总淀粉粒湿品，得水稻总淀粉粒；(2)分离纯化水稻A、B型淀粉粒：向水稻总淀粉粒中加水，使水稻总淀粉粒悬浮，得水稻总淀粉粒悬浮液；将水稻总淀粉粒悬浮液平铺在体积分数为75‑85％的细胞分离液表面，在18‑22g的离心力下离心18‑22分钟后，分层，上层为B型淀粉粒悬浮液，下层为A型淀粉粒沉淀；用体积分数为90‑100％的细胞分离液洗涤A型淀粉粒沉淀2‑3次，得A型淀粉粒粗品；所述用体积分数为90‑100％的细胞分离液洗涤A型淀粉粒沉淀指：向A型淀粉粒沉淀中加入水，使A型淀粉粒沉淀悬浮，得A型淀粉粒沉淀悬浮液；将A型淀粉粒沉淀悬浮液平铺在体积分数为95‑100％的细胞分离液表面后，再离心；将A型淀粉粒粗品先用水离心洗涤2‑3次，再用体积分数为70‑80％的乙醇溶液离心洗涤2‑3次，得A型淀粉粒湿品；风干A型淀粉粒湿品，得A型淀粉粒；将B型淀粉粒悬浮液在4000‑6000g的离心力下离心18‑22分钟后，得B型淀粉粒沉淀；向B型淀粉粒沉淀中加入体积分数为75‑85％的细胞分离液，在18‑22g的离心力下离心18‑22分钟后，分层得上层悬浮液1和下层沉淀1；将上层悬浮液1在4000‑6000g的离心力下离心18‑22分钟后，分层得下层沉淀2和上层悬浮液2；向下层沉淀2中加入体积分数为75‑85％的细胞分离液，在18‑22g的离心力下离心18‑22分钟后，分层得上层悬浮液3和下层沉淀3，下层沉淀3为B型淀粉粒粗品；将B型淀粉粒粗品先用水离心洗涤2‑3次，再用体积分数为70‑80％的乙醇溶液离心洗涤2‑3次，得B型淀粉粒湿品；风干B型淀粉粒湿品，得B型淀粉粒。