[发明专利]一种毛细管电泳分离小麦醇溶蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种毛细管电泳分离小麦醇溶蛋白的方法。所述方法包括如下步骤：以阳离子型聚乙烯吡咯烷酮作为材料，在毛细管的管壁上制备涂层；采用毛细管电泳分离小麦样品，即实现小麦醇溶蛋白的分离；所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮为阳离子化的聚乙烯吡咯烷酮，粘均分子量为20000～25000；按照下述步骤制备所述涂层：依次采用所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和运行缓冲液A冲洗所述石英毛细管。本发明以阳离子化的聚乙烯吡咯烷酮(CPVP)作为涂层材料，对毛细管柱进行动态修饰，通过优化，筛选出小麦醇溶蛋白适宜的抽提分离条件，建立了一个稳定分离小麦醇溶蛋白技术方法，能有效区分不同品种的小麦醇溶蛋白，成为一种小麦品种指纹图谱分离技术。

主权项

1.一种毛细管电泳分离小麦醇溶蛋白的方法，包括如下步骤：以阳离子型聚乙烯吡咯烷酮作为材料，在毛细管的管壁上制备涂层；采用毛细管电泳分离小麦样品，即实现小麦醇溶蛋白的分离；所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮为二甲基二烯丙基氯化铵和乙烯吡咯烷酮的共聚物，其粘均分子量为20000~25000；按照下述步骤制备所述涂层：依次采用所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和运行缓冲液A冲洗所述毛细管；所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液冲洗后包括静置的步骤；所述阳离子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液的质量百分比浓度为0.1~0.5%；所述运行缓冲液A为pH为6.5的磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液；所述毛细管电泳分离的条件如下：电压为12~18kv；运行缓冲液B为pH为6.5的磷酸盐缓冲液与乙腈的混合液；所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM~20mM；所述磷酸盐缓冲液与所述乙腈的体积比为4：1；时间为25~40分钟；所述小麦样品经如下预处理：小麦种子粉碎、烘干并过筛后，进行如下提取步骤：1）采用氯化钠水溶液进行提取，离心后取上清液A；2）采用氯化钠水溶液提取所述上清液A，离心后取沉淀；3）采用乙醇水溶液提取所述沉淀，离心后取上清液B用于所述毛细管电泳分离；所述氯化钠水溶液的浓度为0.1~0.2M；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70~75%。