[发明专利]一种His标签抗原的合成方法

摘要

一种His标签抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明包括His标签半抗原的设计与合成，His标签完全抗原的合成。本发明以6个His多肽的His‑tag为单位，两个多肽序列之间间隔3个天冬氨酸，形成含有三个His‑tag单位的多肽序列，并且在序列氨基端增加一个半胱氨酸，从而可以利用SPDP将半胱氨酸的巯基将多肽序列和载体蛋白进行偶联。将制备的抗原进行小鼠免疫，得到了效价高、竞争抑制效果好的抗His‑tag的抗体，因此表明这是一种His‑tag抗原的合成有效方法，为His‑tag抗体的制备提供了重要的理论依据。

主权项

一种His标签抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤：His标签半抗原的设计与合成His标签半抗原的多肽序列组成为：5’‑CHHHHHHDDDHHHHHHDDDHHHHHH‑3’；根据设计出的多肽序列，使用多肽合成仪进行多肽序列的合成；His标签完全抗原的合成His标签完全抗原的合成流程为：使用异双功能团交联剂N‑琥珀酰胺‑3‑(2‑吡啶二硫)‑丙酸酯SPDP将钥孔血蓝蛋白KLH和His标签多肽进行偶联；首先将SPDP用N,N‑二甲基甲酰胺进行溶解，配置成10mg/mL的浓度，称取10mg KLH，将其用pH7.5 0.01M的PBS缓冲液进行溶解，配置成5mg/mL的浓度，在搅拌的状态下逐滴加入SPDP溶液，使得KLH和SPDP以1:10~1:50的摩尔比进行反应，室温反应30~60min后，将反应溶液用pH7.40.01M的PBS缓冲液透析3次，以除去多余的SPDP；在以上得到的溶液中加入二硫苏糖醇使得其终浓度为1mM，在搅拌状态下反应30min后，将溶液用超滤管进行超滤，以除去多余的二硫苏糖醇再用PBS缓冲液将溶液重悬；向二硫苏糖醇处理的溶液中以KLH:His标签多肽为1:10~1:50的摩尔比加入His标签多肽，在室温条件下搅拌反应2~4h，反应完成后，将溶液用PBS缓冲液进行透析，从而得到His标签完全抗原。