[发明专利]重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201710770174.X | 申请日： | 2017-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN107312781B | 公开（公告）日： | 2020-04-21 |
| 发明（设计）人： | 曾庆明 | 申请（专利权）人： | 曾庆明 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/70;C07K14/31;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 江锦利 |
| 地址： | 528200 广东省佛山市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白及其制备方法与应用。本发明将优化后的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的基因的核苷酸序列重组于大肠杆菌表达系统中，通过诱导表达和纯化，得到重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素融合蛋白，制得的重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的浓度不低于2.01mg/mL，纯度＞90％。与现有技术相比，本发明通过控制低温超声条件、选择两次镍琼脂糖亲和层析以及Triton X‑114试剂的添加严格控制去内毒素，为后续蛋白的应用安全提供保障。制得的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白可光蛋应用于医药和日化领域。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 金黄色 葡萄球菌 毒素 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的制备方法，其特征在于包含如下步骤：(1)通过全基因合成，得到如SEQ ID NO.1所示的编码重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的基因；(2)使用引物X5523‑1和引物X5523‑34对步骤(1)得到的基因进行PCR扩增，得到目的片段并回收纯化；(3)将步骤(2)回收纯化后的目的产物与载体进行连接，得到重组质粒；(4)将步骤(3)制得的重组质粒转入宿主细胞中，得到表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株；(5)将步骤(4)制得的表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株作为表达菌株，基于大肠杆菌表达系统进行诱导表达；离心收集菌体，洗涤悬浮，然后超声破碎，离心，收集上清，纯化，得到重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白。
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