[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒的分离培养方法

摘要

一种猪流行性腹泻病毒的分离培养方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括从临床疑似PED患病仔猪采集肠道内容物和粪便，分别加入生理盐水，并将肠道内容物匀浆，粪便样品进行振荡混匀，再加入病毒处理溶液，混合均匀，静置，离心，取上清，先经微孔滤膜进行过滤处理，再微孔滤膜进行过滤，即得PEDV病毒原液；取已培养24h贴壁生长良好的Vero细胞，弃去细胞培养液，将PEDV病毒原液与维持液接种至细胞瓶内，将细胞瓶置于培养箱中培养，每天观察细胞病变，收集病变明显的细胞培养液，置于‑20℃保存。本发明提出的分离培养方法成本低廉，分离周期短，有利于猪流行性腹泻病毒病的及时诊断和研究。

主权项

1.一种猪流行性腹泻病毒的分离培养方法，其特征在于包括以下步骤：1）从临床疑似PED患病仔猪采集肠道内容物和粪便，分别按质量体积比1：1-1:3加入生理盐水，并将肠道内容物匀浆，粪便样品进行振荡混匀，再按体积比1:2 -1:10加入病毒处理溶液，混合均匀，静置5-15min，然后按4000-8000 r/min，8-15 min进行离心，取上清，先经0.45 um的微孔滤膜进行过滤处理，再经过0.22um的微孔滤膜进行过滤，即得PEDV病毒原液；2）取已培养24h贴壁生长良好的Vero细胞，弃去细胞培养液，将PEDV病毒原液与维持液按体积比1:5-1:50接种至细胞瓶内，同时设PEDV的阳性对照和空白对照组，将细胞瓶置于37℃、5%CO2培养箱中培养96-120h，每天观察细胞病变，收集病变明显的细胞培养液，置于-20℃保存。