[发明专利]一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法

摘要

本发明涉及一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，属于生物工程与技术领域。其制备步骤依次包括斜面菌种活化培养、液体菌种的制备、液体发酵培养、真空冷冻干燥、超微粉碎、水提取、色素的去除、醇沉多糖、蛋白质的去除及精制多糖的制备。本发明通过液体发酵的方法培养鸡枞菌菌丝体，不仅克服了现有技术中鸡枞菌人工栽培困难的问题，且可以大规模生产鸡枞菌菌丝体，降低生产成本；其次，本发明将发酵所得菌丝体真空冷冻干燥、超微粉碎后，采用热水浸提，并协同微波‑超声波技术，显著提高了鸡枞菌多糖的提取率，且所得多糖具有良好的抗氧化和降脂活性。

主权项

一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、斜面菌种活化培养：从母种培养基上取1cm2的菌块，接种到斜面培养基上，扩大培养至菌丝体长满斜面的2/3以上；S2、液体菌种的制备：挑取步骤S1中活化好的斜面菌种，将其转接入液体培养基中，置于摇床中恒温培养，制得液体菌种；S3、液体发酵培养：将步骤S2中制得的液体菌种接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，得到包含鸡枞菌菌丝体的发酵液，将发酵液过滤，取滤渣，得鸡枞菌菌丝体；S4、真空冷冻干燥：将步骤S3制得的鸡枞菌菌丝体放入‑26～‑32℃冰箱内预冻90～110min，再将其放入真空冷冻干燥机内，启动真空泵抽真空，干燥至最终水分含量为5～10％；S5、超微粉碎：将步骤S4制得的鸡枞菌菌丝体放入摇式粉碎机中进行间歇式粉碎，然后将粉末过80目筛，得鸡枞菌菌丝体粗粉，再将鸡枞菌菌丝体粗粉置于超微粉碎机进行粉碎，即得鸡枞菌菌丝体超微粉；S6、水提取：将步骤S5制得的鸡枞菌菌丝体超微粉加入蒸馏水中，用超声波微波组合系统处理后，再用水浴恒温浸提，浸提完成后6000r/min离心12min，得到上清液A；S7、色素的去除：按重量比为1:1.5将AB‑8树脂浸泡在95％乙醇中，24h后装柱水洗至无醇味后，将上清液A加入AB‑8树脂去除色素，AB‑8树脂与上清液体积比为3:5；S8、醇沉多糖：用旋转蒸发仪将去除色素的上清液减压浓缩至原体积的五分之一后，加入3倍体积的95％乙醇，混合均匀，于4℃冰箱中醇沉10h，多糖呈絮状沉淀析出，5000r/min离心10min，收集沉淀，得鸡枞菌粗多糖；S9、蛋白质的去除：将鸡枞菌粗多糖复溶于蒸馏水中，用Sevag法去除溶液中的蛋白质；S10、精制多糖的制备：向步骤S9所得的去除蛋白质的溶液中加入3倍体积的95％乙醇得到沉淀，5000r/min离心10min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得鸡枞菌精制多糖，即本发明所述的鸡枞菌多糖。