[发明专利]一种小鼠骨骼肌卫星细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201710789750.5 | 申请日： | 2017-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN109423475A | 公开（公告）日： | 2019-03-05 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明提供了一种小鼠骨骼肌卫星细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：（1）腹腔注射戊巴比妥钠麻醉处死ICR小鼠，置于75%酒精浸泡消毒；（2）将小鼠后腹面向上固定于板上，无菌条件下剥开后肢皮肤，取股骨部位肌肉组织；（3）无菌操作台内，PBS清洗3次，剔除表面血管、肌腱、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（7）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）ELISA法检测；（11）RT‑PCR检测。本发明提供的一种小鼠骨骼肌卫星细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的小鼠骨骼肌卫星细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠骨骼肌 卫星细胞 细胞 胰蛋白酶 部位肌肉组织 差速贴壁法 成纤维细胞 完全培养基 无菌操作台 戊巴比妥钠 消化 表面血管 腹腔注射 结缔组织 酒精浸泡 染色检测 无菌条件 细胞活性 细胞滤液 细胞形态 肌腱 胶原酶 培养瓶 预热的 股骨 包被 腹面 后肢 剪碎 小鼠 重悬 锥虫 去除 成活率 剔除 接种 麻醉 消毒 并用 皮肤 检测 | ||
【主权项】：
1.一种小鼠骨骼肌卫星细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）腹腔注射戊巴比妥钠麻醉处死ICR小鼠，置于75%酒精浸泡消毒；（2）将小鼠后腹面向上固定于板上，无菌条件下剥开后肢皮肤，取股骨部位肌肉组织；（3）无菌操作台内，PBS清洗3次，剔除表面血管、肌腱、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（7）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）ELISA法检测；（11）RT‑PCR检测。
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