[发明专利]一种尿酸人工抗原的制备方法

摘要

一种尿酸人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明包括尿酸半抗原的改造和尿酸完全抗原的合成，首先利用尿酸分子上易发生反应的亚氨基位点作为反应基团，与氨基丙酸分子上的羧基发生酰化反应，使得改造后的尿酸半抗原含有可反应的氨基，利用改造后的氨基与载体蛋白进行偶联。本方法操作简单方便，所制备的抗原免疫出的抗体对尿酸检测的灵敏度高，可以满足尿酸的检测需求，因此，本发明为尿酸抗体的制备提供了重要的研究和实用价值。

主权项

一种尿酸人工抗原的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）尿酸半抗原的改造称取20mg尿酸加入到100mL圆底烧瓶中，加入10mL的水溶液，用NaOH溶液将溶液pH调整到9.0使尿酸进行溶解，再加入20~30mg氨基丙酸，最后加入2~4mL纯度为99%的一水合肼溶液，将反应体系置于水浴加热磁力搅拌器上，在100℃的条件下进行冷凝回流反应5~8h后，加入300μL饱和碳酸钠溶液终止反应，并将反应体系自然冷却至室温；反应液用三氯乙酸进行3次萃取，每次三氯乙酸的使用量为15mL，收集三氯乙酸有机相，用旋转蒸发仪将三氯乙酸在50℃的条件下旋干，从而得到改造后的尿酸半抗原；（2）尿酸人工抗原的合成将步骤（1）得到的半抗原用2mL N,N‑二甲基甲酰胺进行溶解，取入10mL的反应瓶中，将其置于磁力搅拌器上，在磁力搅拌的状态下加入30μL 25%的戊二醛溶液，室温条件下反应30min；将牛血清蛋白BSA用pH7.2的0.01M PBS缓冲液溶解成5mg/mL的浓度，然后在搅拌的状态下将以上反应液逐滴加入到10~20mL 5mg/mL的BSA溶液中，反应4~8h后，将反应液置于透析袋中用pH7.2的0.01M PBS缓冲液进行透析，透析4次后，将溶液从透析袋中取出，即得尿酸人工完全抗原；（3）人工抗原的鉴定将步骤（2）制备的人工抗原和BSA溶液进行SDS‑PAGE进行分析，人工抗原和5mg/mL的BSA的上样量均为1μL；同时将尿酸、尿酸人工抗原、BSA溶液用紫外分光光度计进行分析。