[发明专利]一种检测等位基因差异表达的方法有效
| 申请号： | 201710809360.X | 申请日： | 2017-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN109486916B | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 李新云;赵书红;赵长志;吴慧;刘华珍;栾宇;陈毅龙;杨高娟;胡素琴;倪娟;谢胜松;赵云霞 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;马思敏 |
| 地址： | 430070 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： |
本发明提供了一种检测等位基因差异表达的方法。具体地，本发明首次基于荧光基团标记引物策略扩增待测基因，利用限制性内切酶酶切的方法进行定量，并通过测定所述第二扩增产物LA的可检测标记的数量M |
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| 搜索关键词： | 一种 检测 等位基因 差异 表达 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测等位基因差异表达的方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一待测样本，所述样本为等位基因cDNA样品；(b)以所述cDNA样品为模板，用第一引物对对所述待测样本的所述等位基因序列进行PCR扩增，从而获得第一扩增产物；(c)以所述第一扩增产物为模板，用带有可检测的标记的第二引物对，对步骤(b)获得的第一扩增产物进行PCR扩增，从而获得第二扩增产物，其中所述的第二扩增产物带有所述的可检测标记；(d)在限制性内切酶的作用下，对步骤(c)获得的第二扩增产物进行酶切，其中，当所述第二扩增产物不含有所述限制性内切酶的酶切位点时，形成未经酶切且带有所述的可检测标记的第二扩增产物LA；当所述第二扩增产物含有所述限制性内切酶的酶切位点时，形成经酶切的且带有所述的可检测标记的第二扩增产物LG，其中所述的第二扩增产物LA的长度L1不同于所述第二扩增产物LG的长度L2；(e)对所述第二扩增产物LA和所述第二扩增产物LG进行分离；和(f)测定所述第二扩增产物LA的可检测标记的数量MLA与所述第二扩增产物LG的可检测标记的数量MLG，从而检测所述等位基因的差异表达。
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