[发明专利]一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法

摘要

本发明公开了一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，包括如下步骤：将鱼皮粉碎、去除杂质；将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟，静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤；收集过滤后的粉碎物，进行第一次提纯、第二次分解和第三次提纯，同时，经过三次提纯和粒子对撞仪得到的纳米级胶原蛋白，经过SGS和PUNY质检检测，达到无雌酮、无氯霉素、无孕酮、无沙门氏菌、无甲基睾酮、无呋喃妥因代谢物、无脂肪、无雌二醇、无无雌三醇，且本发明将鱼皮进行处理后获得的浆液用于进行胶原蛋白的提取，能够明显增加胶原蛋白的提纯率和纯度；再经过纳米级胶原蛋白提纯设备提纯之后得到纳米级混合粉，最后将其经过粒子对撞仪对撞之后得到分子量均匀的纳米级胶原蛋白，其吸收率可以达到96%。

主权项

1.一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，其特征在于：包括如下步骤：1）粉碎：先对鱼皮进行精华检测，即分为抗生素检测、重金属残留检测、雌性激素检测和动物源毒素残留检测，然后将鱼皮加入超纯水浸泡，直到含有胶原蛋白的原料冻成松散的组织颗粒，用玻璃棒搅拌均匀，成糊状；将糊状的组织颗粒再加入10倍体积的超纯水，按组织捣碎机的操作规程匀浆3次，至完全悬浮；将组织颗粒绞碎均匀后加入超纯水至组织的含量为25克／升，混匀；加冰醋酸至组织悬浮液，调制溶液浓度0.5毫克/毫升；消化：称取胃蛋白酶，将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/ml的胃蛋白酶溶液，然后转入到组织悬浮液至0.1mg/ml，即每100ml匀浆中加入1ml的胃蛋白酶溶液，混匀，室温消化7‑10天；2）去除杂质：将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟；静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤，收集过滤后的粉碎物；3）第一次分解：中第一次分解包括以下步骤：将步骤2)中的粉碎物与水以体积比为1:3的比例混合得混合物，并将温度调节至30℃，温度pH为7；将含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的培养液以体积比2:1的比例搅拌混合5分钟，加入到混合物中；匀速搅拌，在温度30℃，pH为7下保持24小时；混合液置入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟，静止沉淀10分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到3000Da‑1000Da的胶原蛋白肽组分；置于真空过滤装置中，抽滤，干燥，灭菌；4）第二次分解：将第一次分解获得的产物与水以体积比为60：40的比例混合，在35℃温度下恒温搅拌30分钟；按胶原蛋白原料重量的0.5％向混合液中加入胰蛋白酶，按胶原蛋白原料重量的5％加入聚二乙醇，继续搅拌10分钟；调节pH值为7‑8，37℃，反应8小时；迅速加热至45℃，终结酶活；混合液放入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000Da以下的胶原蛋白肽组分；5）第一次提纯：在上述步骤中得到的1000Da以下的胶原蛋白肽组分加入阴离子交换树脂，搅拌浸泡3‑3.5h,让树脂完全吸附料液的色素和腥味；用层析柱将料液和树脂分离；杀菌，杀菌后过滤，将料液通过超滤膜分离装置过滤，得超滤透析液；离心提纯：将透析后的溶液高速冷冻离心，最后通过微分子对撞工艺进行最后的提纯，所得沉淀为最后纯化的胶原蛋白；6）第二次提纯：再将最后纯化后的胶原蛋白，经过一种纳米级胶原蛋白提纯设备（我公司专利设备）提纯之后得到纳米级混合粉；7）纳米级混料进行对撞：将混合的纳米级胶原蛋白粉，置于粒子对撞仪中，进行对撞，最终得到分子量比较品均的纳米级胶原蛋白。