[发明专利]一种间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的方法

摘要

本发明公开了一种间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的方法，包括如下步骤术前准备、干细胞移植和术后处理，本发明MSC移植具有提高轴突再生的能力，阻止脱髓鞘，促使髓鞘再生和促进脊髓修复与脊髓损伤后神经功能缺失的恢复等作用；并已得到实验证实，MSC移植作为细胞移植治疗脊髓损伤的重要组成部分，在很多方面都取得了一些成果，甚至将研究提高到了基因克隆的程度高度；MSC的众多优点使其受到学术界的青睐，为脊髓损伤患者的治疗带来了新的希望，同时MSC来源广泛,获取方便；没有伦理学限制；增殖能力强，具有较强的细胞活性；具有良好的分化调控性；具备多向分化潜能；可作为基因治疗的良好载体。

主权项

一种间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)术前准备：术前用药：术前用药具有镇静、镇痛等作用；常用的药物为苯巴比妥钠0.05～0.1g，盐酸哌替啶25～50mg；一般在术前30分钟肌内注射；干细胞制备：抽取患者自身骨髓10ml，肝素化处理后，使用密度梯度细胞分离液Percoll(1.073g/ml；GE Healthcare，Piscataway，NJ，USA)对骨髓进行梯度离心，收集单核细胞，以1.6×105/cm2的接种密度置于含有10％血清替代物(Serum Replacer；Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)、1％非必需氨基酸(Invitrogen)和1mM L‑谷氨酰胺(Invitrogen)的低糖DMEM培养基(Invitrogen)中培养1周。随后将细胞消化成单细胞悬液，通过流式细胞仪分选CD105+CD73+CD45‑的细胞作为MSC。术前收集培养扩增的MSC并用生理盐水将其制备成2×0.05ml细胞悬浊液，细胞浓度为4×108/ml，备用；2)干细胞移植：气管插管全麻，取侧卧位，行后入路脊髓探查术+干细胞移植术，后正中入路完全暴露脊髓损伤部位，并向近端及远端各延长一个椎体，显露正常脊髓，将预制好的0.05ml细胞悬浊液分别注入邻近损伤部位的两侧正常脊髓内即可；3)术后处理：(一)生命体征监测术后患者俯卧位4‑6小时，每30分钟观察并记录l次，了解患者生命体征是否平稳，有无不适主诉。观察以下内容：(1)生命体征：血压应保持在140/60mmHg之间，呼吸为10‑20次/分钟，脉搏为60‑100次/分钟，体温在38.5℃以下，动脉血氧饱和度数值保持在92％以上；(2)手术创口渗出情况；(3)尿排出时间和量；(4)静脉通道有无阻塞，有无输血、输液等并发症；(5)术后医嘱执行情况；(二)神经检查将神经检查结果与术前对比，判断手术对脊髓功能的影响；原有损伤平面有无升高，有无新的神经损伤症状和体征；必要时，辅以肌电图、脊髓诱发电位等特殊检查。肢体功能障碍加重，感觉平面上升，表明脊髓功能有进一步的损害，应积极找出原因，及时处理；颈椎手术者应密切注意呼吸情况；(三)输液术后常规应用抗感染、神经营养药物以及改善微循环等治疗，常规应用3天；必要时，可给予脱水、激素和补液治疗；(四)神经功能锻炼在大多数无并发症的患者最好在伤后1‑2周转入康复；康复中心的患者需要坐于轮椅上，使用固定及支架矫正器，如颈托、Halo支架或胸腰骶矫正器，并能够执行康复计划；康复的总目标是使每个患者能重返社会，并有最大的独立性及可行性；一般四肢瘫痪患者的住院时间是2‑3个月，截瘫患者1‑2个月；大多数患者恢复的出现是在伤后第l年，伤后的第2年达到最大的医疗进步；从康复中心出院前对每个患者做一个终身护理计划，患者每年至少来医院两次；基于一个好的终身护理随访计划，现在脊髓损伤后度过急性期的患者只有10％的死亡率，并有一个预期相对正常的生活；进一步可进行轮椅运动，如田径、游泳等活动；行干细胞移植术后，如患者无明显不适，第2天即可进行轻度的神经功能康复锻炼，如上肢及下肢运动、肢体各关节被动活动和肌肉按摩。