[发明专利]一种制备四种氯化烟碱类杀虫剂通用抗原的方法

摘要

一种制备四种氯化烟碱类杀虫剂通用抗原的方法，属于生物化工技术领域。本发明以含有啶虫脒、吡虫啉、噻虫啉和烯啶虫胺共同母核结构的啶虫脒为半抗原，合成了以上四种氯化烟碱类杀虫剂通用人工完全抗原，将啶虫脒侧链的氰基还原为氨基，再通过戊二醛法将啶虫脒上还原后的氨基与载体蛋白的氨基进行偶联，制备出完全抗原。此方法步骤简单，通过酶联免疫实验分析具有较高的效价，并且对四种氯化烟碱类杀虫剂具有良好的竞争抑制效果，证实了通过用人工抗原的成功合成，此类方法为氯化烟碱类杀虫剂通用抗体的制备提供了重要的研究价值。

主权项

一种制备四种氯化烟碱类杀虫剂通用抗原的方法，其中氯化烟碱类杀虫剂为啶虫脒、吡虫啉、噻虫啉和烯啶虫胺，其特征在于包括如下步骤：（1）Ni‑Al2O3催化剂的合成在烧杯中加入200mL去离子水，置于加热反应器上加热至80℃，然后将浓度均为1M的100mL硝酸镍溶液和100mL碳酸钠溶液同时加入到烧杯中，在机械搅拌状态下反应1~2h，然后将溶液的pH调整到8.5，随后加入5g氧化铝粉，继续加热搅拌反应50min，将溶液抽滤并用水洗4次，然后将滤饼放入烘箱中120℃条件下过夜烘干，研磨过筛；再将研磨过筛的粉末置于管式还原器中500℃下煅烧3h，再通入氮气、氢气反应3h后关闭加热使其自然降温，将制得的固体催化剂密封保存；（2）氯化烟碱类杀虫剂通用人工半抗原的合成称取20mg啶虫脒于100mL反应瓶中，加入5mL甲醇将其溶解，再加入5mg步骤（1）制备的催化剂，然后抽真空，通入氨气和氢气，使得体系的反应压力在0.5MPa，于室温下反应2~4h后，将反应液进行离心分离出上清液体，再在35℃条件下用旋转蒸发仪将溶剂旋干，旋干后的固体即为氯化烟碱类杀虫剂通用人工半抗原；（3）氯化烟碱类杀虫剂通用人工完全抗原的合成将步骤（2）制备的半抗原用1mL甲醇溶解，然后再加入5mL 0.01M pH7.2的PBS缓冲液，置于磁力搅拌器上进行搅拌，在搅拌的状态下加入0.5~1mL稀释10倍的25%戊二醛溶液，室温搅拌反应20min，将其逐滴加入到10mL 0.01M pH7.2的PBS缓冲液溶解的50~100mg牛血清蛋白BSA中，室温反应3h后将反应液在PBS缓冲液中透析3次，透析后的溶液即为氯化烟碱类杀虫剂通用人工完全抗原；（4）氯化烟碱类杀虫剂通用人工完全抗原的鉴定用10%的SDS‑PAGE凝胶电泳和紫外吸收光谱对合成的完全人工抗原进行鉴定。