[发明专利]一种提高地衣芽胞杆菌发酵生产莽草酸的方法及工程菌

摘要

本发明提供了一种显著提高地衣芽胞杆菌发酵生产莽草酸水平的方法及工程菌。本发明采用分子生物学技术，通过基因工程改造增加PEP与E4P合成水平，并切断莽草酸下游代谢途径，提高地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)中莽草酸的产量。本发明构建了地衣芽胞杆菌产莽草酸工程菌WX‑02ΔpykΔaroKΔpgi/pHY‑aroD。该菌株在优化培养基和培养条件下可以显著提高莽草酸的合成，终产量高达16.78g/L。本发明通过敲除pyk，aroK与pgi和过表达aroD基因的组合以及发酵工艺优化实现了地衣芽胞杆菌高产莽草酸。

主权项

一种高产莽草酸的地衣芽胞杆菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌株是将地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX‑02的丙酮酸激酶基因pyk、莽草酸激酶编码基因aroK，和6‑磷酸葡萄糖异构酶基因pgi敲除，构建WX‑02ΔpykΔaroKΔpgi菌株，再将枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)168的P43启动子、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX‑02的莽草酸脱氢酶基因aroD和淀粉酶基因amyL的终止子连接至表达载体得到重组质粒，再将重组质粒转化WX‑02ΔpykΔaroKΔpgi菌株所得到的高产莽草酸的地衣芽胞杆菌工程菌株WX‑02ΔpykΔaroKΔpgi/pHY‑aroD。