[发明专利]鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的微卫星引物、应用及鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的方法

摘要

本发明提供了鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的微卫星引物、应用及鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的方法，将来自不同株系的雌性蝇蛹金小蜂和雄性蝇蛹金小蜂交配，获得具有鉴别性的寄生蜂卵；对获得的有鉴别性的寄生蜂卵进行DNA提取；以此为模板，利用设计的引物进行PCR扩增，所得产物通过琼脂糖凝胶电泳跑条带，根据条带数来判断卵的雌雄，单条带为未受精的单倍体卵，即雄性；双条带为受精的二倍体卵，即雌性。与现有技术相比，本发明利用微卫星的特点，设计微卫星引物，与寄生蜂的性别决定方式相结合，成功鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别。

主权项

1.一种利用鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的微卫星引物鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的方法，包括以下步骤：/n1）饲养并建立家蝇繁殖株系，获得家蝇蛹，使用家蝇蛹在国内安徽芜湖和新疆乌鲁木齐两个地区诱集寄生蜂，通过形态鉴定，获得蝇蛹金小蜂；实验室内建立两个地理品系蝇蛹金小蜂的培养株系；/n2）在寄生蜂寄生家蝇蛹15天后，利用5ml容量的冻存管，分装单个家蝇蛹，确保每只出蜂的寄生蜂是未交配状态，出蜂后的未交配寄生蜂饲养一天，安徽芜湖株系寄生蜂与新疆乌鲁木齐株系寄生蜂交配，并给寄主家蝇蛹供其寄生产卵，获得具有鉴别性的寄生蜂卵；/n3）对步骤2）获得的有鉴别性的寄生蜂卵进行DNA提取；/n4）以步骤3）提取的DNA为模板，利用鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的微卫星引物进行PCR扩增，所得产物通过琼脂糖凝胶电泳跑条带，根据条带数来判断卵的雌雄，单条带为未受精的单倍体卵，即雄性；双条带为受精的二倍体卵，即雌性；/n所述微卫星引物的上下游核苷酸序列为：/nAF1F：ACAGCAACCAAGTCGGCTAT，AF1R：CATGCAGAGTCGATGCAGAT；/n微卫星序列扩增片段的重复基序为(GA)