[发明专利]一种水稻纹枯病的生物防治方法

摘要

一种水稻纹枯病的生物防治方法，涉及水稻病虫害的生物防治技术领域，包括以下步骤制备NA固体培养基、制备LB液体培养液、制备种子液、制备发酵液、制备发酵液提取物、制备混配剂、水稻定殖。发酵提取物混配井冈霉素对水稻纹枯病菌的防治具有协同作用，能显著增强井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果，为提高井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果提供了一定的理论依据，并为拓展拮抗细菌生物农药的应用提供了一条有效途径。

主权项

一种水稻纹枯病的生物防治方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：制备NA固体培养基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸馏水溶解，定容至1L，PH调至7±0.1，分装后121℃灭菌20min；步骤二：制备LB液体培养液，在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，搅拌直至溶质溶解，用5mol/LNaOH调pH至7.0，用去离子水定容至1L，在15psi高压下蒸汽灭菌21min；步骤三：将拮抗细菌在NA固体培养基上于37℃活化24h，用无菌水制成菌体悬浮液，取10mL菌体悬浮液接种到装有100mLLB液体培养液的250mL锥形瓶中，在28℃的恒温条件下以220r/min的速率震荡培养48h，得到种子液；步骤四：种子液以10％的接种量接入装有300mLLB液体培养液的1000mL锥形瓶中，磁力搅拌，转速为1000r/min，置于28℃的振荡培养箱中连续培养84h，得发酵液；步骤五：将发酵液和乙酸乙酯以质量比1:2充分混匀萃取48h，取萃取液于40℃旋转蒸发仪中，以110r/min的转速旋转蒸发至膏状，用无菌水溶解，配成质量浓度为1000mg/L的发酵液提取物，置于4℃冰箱保存备用；步骤六：在无菌条件下，将发酵液提取物和质量浓度500mg/L的井冈霉素按质量比4:1混合均匀得混配剂；步骤七：水稻种子用质量浓度70％的乙醇溶液浸泡2min，然后用质量浓度3％的次氯酸钠水溶液浸泡30min，期间用玻璃棒搅动，无菌水冲洗3次，第3次冲洗持续10min，过夜干燥，置于铺有两层湿润滤纸片的培养皿中，再放于37℃恒温培养箱培养4d直至发芽，最后将发芽的水稻种子播种于田地，在水稻生长的第10、20、50和80天向水稻叶面喷洒混配剂。