[发明专利]一种对水质敏感的真核微型生物T‑RFLP片段的筛选方法在审
| 申请号： | 201710885663.X | 申请日： | 2017-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN107805658A | 公开（公告）日： | 2018-03-16 |
| 发明（设计）人： | 伊珍珍;朱昶宇;王宇涛;许正生;谈勇;孙雷;苏健成;邱丘 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学;广州市城市排水监测站（广州市水质监测中心;广州市水土保持监测站） |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司44202 | 代理人： | 郝传鑫,宋静娜 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种对水质敏感的真核微型生物T‑RFLP片段的筛选方法，属于微型生物生态技术领域。本发明的筛选方法包括以下步骤(1)采集水样，并测定各水样样本的理化因子；(2)提取总DNA；(3)对真核微生物的18SrRNA基因的v4区进行PCR扩增，回收、纯化扩增产物并进行酶切，测定酶切产物，得到T‑RFLP数据和图谱；(4)根据步骤(3)得到的T‑RFLP数据，计算各水样样本中相同片段峰面积之和占总峰面积的百分比；(5)对理化因子与目的片段进行相关性分析，筛选出对理化因子变化敏感的片段。本发明利用真核微型生物，筛选出对特定理化因子敏感以及存在于特定理化因子范围的类群。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水质 敏感 微型 生物 rflp 片段 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种对水质敏感的真核微型生物T‑RFLP片段的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)采集水样，并测定各水样样本的理化因子；(2)提取各水样样本的总DNA；(3)以步骤(2)提取的总DNA为模板、以18SrRNA基因引物为引物，对真核微型生物的18SrRNA基因的v4区进行PCR扩增，回收、纯化扩增产物并进行酶切，测定酶切产物，得到T‑RFLP数据和图谱；其中，所述通用引物中，一条引物的5’末端带有荧光标记；(4)将步骤(3)得到的T‑RFLP数据进行预处理，先删除size小于50和大于500的片段，再计算各水样样本中相同片段峰面积之和占总峰面积的百分比，删除百分比小于1％的片段，得到目的片段；(5)根据步骤(1)测得的各水样样本的理化因子以及步骤(4)计算的百分比，对理化因子与目的片段进行相关性分析，筛选出对理化因子变化敏感的片段。
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