[发明专利]一种粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法在审
| 申请号： | 201710914644.5 | 申请日： | 2017-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN107748251A | 公开（公告）日： | 2018-03-02 |
| 发明（设计）人： | 吴铮;丁先骏;吴泽东;庄庆华;张金东 | 申请（专利权）人： | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531;G01N33/536;G01N33/68 |
| 代理公司： | 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙)34124 | 代理人： | 王志兴 |
| 地址： | 236000 安徽省合肥市包河经济开发区繁*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤(1)按试剂R1组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；将NaCl、NaN3、BSA、EDTA、Tween‑20、PEG‑8000溶于MES缓冲液，得R1缓冲液；将生物素偶联的抗体共价物溶于R1缓冲液，得试剂R1；(2)按试剂R2组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；将NaCl、NaN3、BSA、甘油溶于MES缓冲液，得R2缓冲液；制备乳胶亲和素共价物；用R2缓冲液溶解乳胶亲和素共价物，得试剂R2。本发明的优点为(1)操作简单、检测准确、成本低；(2)增加生物素‑亲合素系统，大大提高了检测灵敏度；(3)适合全自动测试。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 粒细胞 集落刺激因子 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种粒细胞集落刺激因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R1的组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、EDTA、Tween‑20、PEG‑8000溶于MES缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，制得R1缓冲液；③按照上述试剂R1的组分含量，将生物素偶联的抗体共价物溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，即得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：其溶剂为纯化水；①按照上述试剂R2的组分含量，配制MES缓冲液并调节pH；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、甘油溶于MES缓冲液中，搅拌均匀，即得R2缓冲液；③制备乳胶亲和素共价物：a.取粒径为120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀0.5‑1.5h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀0.5‑1.5h，离心去上清；b.将剩余物质分散于MES缓冲液中，加入亲和素，37℃下反应3‑5h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2‑4次；最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入酪蛋白；c.2‑8℃封存45‑50h，得最终所需的乳胶亲和素共价物；④用R2缓冲液来溶解得到的乳胶亲和素共价物，超声分散，最终制得试剂R2。
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