[发明专利]一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法

摘要

本发明公开了一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤(1)按试剂R1组分含量，配制PBS缓冲液，调pH，作R1缓冲液；将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG‑8000溶于R1缓冲液，得试剂R1；(2)按试剂R2组分含量，配制PBS缓冲液，调pH，作R2缓冲液；将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液，得R2分散液；制胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；R2分散液溶解胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，得试剂R2。本发明的优点为(1)操作简单、快速；(2)试剂盒灵敏度、准确度高；(3)采取不同粒径胶乳微球，提高试剂盒灵敏度和线性范围；(4)试剂盒稳定性佳，特异性强；(5)适合全自动测试。

主权项

一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：①按照上述试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG‑8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：①按照上述试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2‑4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗体，于37℃下反应3‑4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2‑4次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA；c.2‑8℃封存45‑50h，得最终所需的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％‑11％。