[发明专利]一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，提供了一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用Rh@Pt纳米枝晶复合材料作为标记物，聚吡咯‑金纳米粒子作为基底，制备了一种电化学免疫传感器并应用于肿瘤标志物抗原的检测。

主权项

1.一种基于负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水、乙醇清洗干净；（2）取6 µL、1 ~ 3 mg/mL的聚吡咯‑金纳米粒子修饰到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，4 °C冰箱中干燥；（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1 wt%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；（5）滴加6 µL、0.0001 ~ 5 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，用pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 °C冰箱中干燥；（6）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的肿瘤标志物检测抗体Rh@Pt/NH₂‑GS/Ab₂溶液，滴涂于电极表面上，置于4 °C冰箱中孵化40 min后用pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液清洗电极，4 °C冰箱中干燥，制得一种基于负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的免疫传感器；所述聚吡咯‑金纳米粒子的制备，步骤如下：（1）聚吡咯的合成取0.5 ~ 1.5 mL吡咯分散在25 mL、0.5 ~ 1.5 mol/L的盐酸里，得吡咯和盐酸的混合液；取10 mL吡咯和盐酸的混合液，搅拌条件下加入2 mL、1 mol/L的过硫酸铵溶液，冰浴反应4 ~ 6 h，离心分离，室温干燥得到聚吡咯；（2）金纳米粒子分散液的制备取1 mL、0.8 ~ 1.2 wt%的氯金酸溶液加入到99 mL超纯水中，加热至微沸，加入2.5 mL、0.5 ~ 1.5 wt%的柠檬酸钠溶液，保持微沸状态15 min后，冷却至室温，得到金纳米粒子分散液，将其转移到4 °C下保存备用；（3）聚吡咯‑金纳米粒子的合成将20 ~ 30 mL上述制备的金纳米粒子分散液离心分离，重新分散在10 mL的超纯水中，加入10 mg聚吡咯，在振荡培养箱中振荡12 h，离心分离，室温干燥，得聚吡咯‑金纳米粒子；所述负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的制备方法及应用的肿瘤标志物检测抗体Rh@Pt/NH₂‑GS/Ab₂溶液的制备，步骤如下：（1）Rh@Pt纳米枝晶的合成取0.21 g柠檬酸钠和0.2 ~ 0.3 g十六烷基三甲基氯化铵加入到9 mL超纯水中，搅拌5 min，依次加入0.1 mL、0.1 mol/L的三氯化铑，0.9 mL、0.08 ~ 0.12 mol/L的氯铂酸，搅拌15 min后，加入1 mL甲醛，将混合液转入高压反应釜中，在180 °C的条件之下反应40 ~ 60 min，冷却至室温，离心分离，冷冻干燥，得Rh@Pt纳米枝晶；（2）氨基化石墨烯的合成取0.8 g石墨粉加90 ~ 98 mL、98 wt%的浓硫酸和10 mL浓磷酸，搅拌25 min后，加入4 ~ 5 g高锰酸钾，搅拌15 min后，加热至45 ~ 60 °C，反应12 h后，加40 mL超纯水冻成的冰，再加0.5 mL，20 ~ 30 wt%的双氧水，搅拌20 min后离心洗涤，加30 mL超纯水，超声40 min，离心分离，将上清液冷冻干燥得到氧化石墨烯；取0.1 g氧化石墨烯放入小烧杯中，加40 mL乙二醇，超声30 min，加0.8 ~ 1 mL浓氨水，将混合物转入高压反应釜，180 °C下反应5 h，冷却到室温，离心分离，室温下干燥得氨基化石墨烯；（3）负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的合成取15 mg氨基化石墨烯和5 ~ 10 mg的Rh@Pt纳米枝晶分散在10 mL超纯水中，超声1 h，离心分离得负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯；（4）负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的肿瘤标志物检测抗体Rh@Pt/NH₂ ‑GS/Ab₂溶液的制备将1 ~ 4 mg的负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯分散到1 mL超纯水中，加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab₂溶液和900 µL、50 mmol/L的pH为7.4磷酸盐缓冲溶液，4 °C恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；在4 °C下，6000 rpm转速下离心10 min，得下层沉淀，加入1 mL、50 mmol/L的pH为7.4磷酸盐缓冲溶液离心洗涤，得下层沉淀，最后加入1 mL、50 mmol/L的pH为7.4磷酸盐缓冲溶液，制得负载Rh@Pt纳米枝晶的氨基化石墨烯的肿瘤标志物检测抗体Rh@Pt/NH₂‑GS/Ab₂溶液，4 °C下保存备用。