[发明专利]一种快速建立基因敲除细胞株的重组载体及其方法

摘要

本发明公开了一种快速建立基因敲除细胞株的重组载体及其方法，载体包括目的基因切割载体、Donor载体和Donor载体的切割载体；然后将以上三种载体共转染目标细胞，转染后48h分别采用药物筛选或流式细胞分选快速富集基因修饰阳性细胞。最后，通过有限稀释法或单克隆挑取获得基因敲除细胞株。该方法采用双筛选标记，具有基因敲除效率高，筛选周期短，获得基因敲除细胞株快的优点，最大限度的缩短了获得基因敲除细胞株的时间，在基因功能研究领域具有重要意义。

主权项

1.一种快速建立基因敲除细胞株的重组载体，其特征在于，包括目的基因切割载体、Donor载体和Donor载体的切割载体，其中：目的基因切割载体为带有针对目的基因设计的gRNA的gRNA/Cas9表达载体；Donor载体为带有针对目的基因种属相异的非同源基因序列设计的gRNA/Cas9靶序列的EGFP和抗性基因表达载体；Donor载体的切割载体为带有针对目的基因种属相异的非同源基因序列设计的gRNA的gRNA/Cas9表达载体。