[发明专利]适用于蛋白组学研究的绒毡层细胞分离与收集方法

摘要

适用于蛋白质组学研究的植物绒毡层细胞分离与收集方法。该技术包括组织细胞固定技术和细胞分离、提取与收集方法。其组织细胞固定操作流程为：收集花蕾于冰盘器皿中—从花蕾中剥离出花药—将花药迅速浸没于盛装固定液的小瓶中—盖盖抽气使固定液迅速渗透入花药组织内部—室温固定一定时间。运用本发明研究技术分离获得的绒毡层细胞纯度大于97%，且细胞形态、结构完整，质量高，经过后续蛋白质电泳检测与蛋白质组学研究证实，由该绒毡层细胞分离提取的总蛋白质量符合蛋白质组学研究要求，其总蛋白分离提取率与分离获得的总蛋白数量均很高。

主权项

1.适用于蛋白质组学研究的绒毡层细胞分离与收集方法，该方法包括细胞固定方法和细胞分离、提取与收集方法，其特征在于：其细胞固定方法为：收集花蕾置于冰盘器皿中，从花蕾中剥离出花药，将花药迅速浸没于盛装固定液的小瓶中，盖盖对盛装固定液的小瓶抽气使固定液迅速渗透入花药组织内部，室温条件操作固定；所述细胞分离、提取与收集方法为：(1)洗涤：经过固定的花药样本用双蒸水置换洗涤3次，每次10分钟，中间摇动混匀1‑2次，洗涤干净花药；（2）分离细胞：A.将花药移入小烧杯中，加少量双蒸水后用平底小棒的顶端轻轻地反复敲打所有花药5分钟，使花药组织中的绒毡层细胞脱离花药并分散开来；B.再加入十几毫升双蒸水，用平底小棒的顶端再次轻轻敲打5分钟；C.用80目细胞筛过滤细胞混合液，滤液置于大烧杯中，滤渣收集入先前的小烧杯中；D.重复B和C操作步骤；E.用80目细胞筛再次过滤，滤液与之前的滤液合并，弃去滤渣； F.用200目细胞筛过滤大烧杯中的细胞混合液，弃去滤渣，保留滤液；G.将滤液用600目细胞筛过滤，弃去含花粉粒的滤液，细胞筛上的成分即为绒毡层细胞；H.用吸管仔细吸取细胞筛上的绒毡层细胞，移入并收集入小离心管中；I.1000rpm/min，室温离心5分钟。