[发明专利]一种脐带组织冻存、复苏的方法

摘要

本发明提供了一种脐带组织冻存、复苏的方法，采用细胞团块而非单个细胞进行冻存，可以降低细胞受损凋亡的概率、提高存活率；通过添加细胞粘附分子，可以促进细胞之间相互粘合，从而进一步减少单个细胞、提高细胞的存活率；为保证冷冻保护液和复苏保存液可以充分渗透到细胞间隙中，事先对其进行超声处理，以便将液体分散成小液滴、提高其渗透性；细胞活性抑制剂可以对细胞内的一些生理活动进行可逆的抑制，在不影响细胞活性的前提下提高冻存效果。通过上述手段，可以降低冷冻过程和复苏过程对细胞造成的物理性和化学性的伤害，从而提高细胞存活率和冻存的复苏率，以便后续使用。

主权项

一种脐带组织冻存、复苏的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：用生理盐水对新鲜脐带进行清洗，并剪碎成小块，贴壁培养36h～48h，并对得到的细胞进行传代培养6～8d；S2：将步骤S1得到的传代细胞置于DMEM培养基中，于2～5℃下加入预先经超声处理过的冻存保护液，低速离心并轻轻振荡混匀，所述冻存保护液中添加有至少一种细胞粘附分子以及至少一种细胞活性抑制剂；S3：将步骤S2得到的细胞混合液置于液氮中，降温至‑196℃下保存；S4：将冻存的细胞取出，立即转移至37℃水浴箱中放置1～2min，取出后用PBS缓冲液洗涤2～4次，离心、弃去洗涤液；S5：向步骤S4得到细胞中加入预先经超声处理过的复苏保存液，轻轻振荡混匀，得到细胞悬液，所述复苏保存液中添加有至少一种细胞粘附解除分子以及至少一种细胞活性激活剂。