[发明专利]一种乌柏组织培养方法

摘要

本发明公开了一种乌柏组织培养方法，特征是落叶乔木，高达12米，具乳液。树皮灰色而有浅纵裂。单叶互生，纸质；棱形至阔菱状卵形，先端长渐尖，基部阔楔形至钝形，全缘，两面均绿色，无毛，秋天变成红色；6~7月开花，花小，绿黄色；果期8~10月，蒴果椭圆状球形，成熟时褐色，室背开裂为3瓣，每瓣有种子1粒。种子近球形，黑色，外被白蜡。皮全年可采，将皮剥下，除去栓皮晒干。生长于华东、华南和等地。乌柏味苦，性温，有毒。具有利水，消积，杀虫，解毒。本发明以乌柏带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了乌柏的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。

主权项

一种乌柏组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：（1）芽诱导培养：以乌柏带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成5.5厘米长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡12min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒35s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒29min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2900lx条件下培养34天，统计其芽诱导率及生长情况；（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为24℃的条件下培养29天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为24℃的条件下培养40天后统计生根情况；（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:1：1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽。