[发明专利]一种大黄组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种大黄组培快繁方法，大黄属多年生草本，肉质根及根状茎粗壮。茎中空绿色，平滑无毛，有纵纹。单叶互生，基生叶圆形或卵圆形，边缘有尖裂齿，叶面生白色短刺毛；茎生叶较小。秋季开淡黄色花，大圆锥花序顶生；瘦果矩卵圆形，有3棱，沿棱生翅，翅边缘半透明。根及根状茎入药。秋末冬初采收，去粗皮，切片干燥备用。多生于阴湿处。大黄味苦，性寒。具有泻实热，破积滞，行瘀血功效。本发明以大黄种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得大黄离体再植株，建立大黄组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量,提高其药材的产量，提供一套快繁增殖的途径。

主权项

一种大黄组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）无菌苗的获得：选取饱满的大黄种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用75%酒精消毒62s，再用0.1%升汞溶液消毒16min，最后用无菌水漂洗6次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照18小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养23天后统计萌发率，所述的萌发培养基为：1/2MS+0.01～0.10mg/LNAA+33g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9;（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.6cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照15小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养31天后统计诱导率，所述的愈伤诱导培养基为：MS+4.0mg/L6‑BA+0.8mg/LNAA+1.2mg/L KT+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9;（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃，空气相对湿度为75%的条件下培养31天后统计增殖情况，所述的增殖培养基为：MS+2.3mg/L6‑BA+0.8mg/L NAA+33g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂，pH为5.9;（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃，空气相对湿度为75%的条件下培养31天后统计分化情况，所述的分化培养基为：MS+1.6mg/LKT+2.6mg/LNAA+33g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9;（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为29℃，空气相对湿度为75%的条件下培养31天后统计生根情况，所述的生根培养基为：1/2MS+1.6mg/LIBA+0.6mg/L NAA+1.6%活性炭+33g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9;（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，8天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝2:2:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,16天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽28天后统计成活率。