[发明专利]测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留的方法

摘要

本发明涉及测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留的方法。该方法采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行测定，包括以下步骤：提供超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪以及牛肺表面活性提取物和对照品，确定色谱条件和质谱条件，进行配液和测试，以及结果处理。该方法可同时测定四环素、金霉素、土霉素、多西环素、美他环素、米诺环素、β‑多西环素、差向四环素、差向金霉素、脱水四环素和脱水差向四环素等11种抗生素及已知杂质。该方法的线性范围、灵敏度、精密度、回收率均满足分析要求。

主权项

测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留量的方法，该方法采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行测定，包括以下步骤：(1)提供超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪；提供牛肺表面活性提取物；提供选自下列的对照品：四环素对照品、土霉素对照品、金霉素对照品、多西环素对照品、美他环素对照品、米诺环素对照品、4‑差向四环素对照品、4‑差向金霉素对照品、β‑多西环素对照品、脱水四环素对照品、脱水差向四环素对照品；(2)色谱条件：色谱柱：WatersHSS T3，柱规格2.1×100mm，填料粒径1.8μm，流动相A：0.1％甲酸的乙腈溶液，流动相B：0.1％甲酸的水溶液，流速：0.3ml/min，柱温：30℃，进样量：1μL，使用下列所示梯度洗脱程序进行洗脱：(3)质谱条件采用三重四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源，毛细管电压为4.5kV，气化室温度为100℃，鞘气压力为40arb；离子吹扫气压力为40arb，辅助气压力为10arb，毛细管温度为350℃；采用选择反应监测模式，监测条件如下表：(4)配液和测试：(41)精密称取四环素对照品、土霉素对照品、金霉素对照品、多西环素对照品、美他环素对照品、米诺环素对照品、差向四环素对照品、差向金霉素对照品、β‑多西环素对照品、脱水四环素对照品以及脱水差向四环素对照品各10mg，精密称定，分别置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各对照品储备液(其浓度为1mg/ml)；(42)分别精密量取各对照品储备液1ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含各组分1μg的溶液，作为分离度试验溶液；取该分离度试验溶液，按“(2)色谱条件”和“(3)质谱条件”项下的色谱和质谱条件进行分离度试验；(43)精密量取上述分离度试验溶液，用甲醇定量稀释成每1ml中含各对照品200ng、100ng、50ng、20ng、10ng、5ng、2ng、1ng和0.5ng的混合溶液，按“(2)色谱条件”和“(3)质谱条件”项下的色谱和质谱条件进行线性范围试验和精密度试验；(44)精密量取每1ml含各对照品100ng的对照品混合溶液0.5ml，置50ml离心管中，另精密称取牛肺表面活性提取物50mg，置同一50ml离心管中，照以下步骤(45)的方法，自“加入McIlvaine缓冲液”起开始处理，平行处理三份，进行回收率试验；(45)精密称取牛肺表面活性提取物50mg，置50ml离心管中，加入McIlvaine缓冲液4～8ml，涡旋使混匀，超声5～15分钟，加入正己烷15～20ml，涡旋5～15分钟，4000～5000rpm离心5～15分钟，弃取下层，清液用于固相萃取上样；采用固相萃取小柱，依次经甲醇、水活化后，取样品上样进行固相萃取，经4～6％甲醇水洗，再用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液；35～45℃条件下N2吹干，残渣用500μl甲醇复溶后，取1μl用于色谱进样；(5)结果处理：记录“(4)配液和测试”各试验测试所得色谱图，计算各方法学验证参数，对牛肺表面活性提取物样品进行定性分析和定量计算。