[发明专利]一种生物土壤固化剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种生物土壤固化剂的制备方法，属于土壤固化剂领域。本发明从菌种中提取一种高活性的催化酶，这种酶可以高效催化尿素的水解生成氨和二氧化碳，通过细胞壁分散到溶液中，溶液中钙离子被吸附到细菌细胞表面，尿素水解后生成的碳酸根将与这些钙离子生成碳酸钙沉淀，包裹住细菌，培养液中尿素分解产生的铵离子有利于碳酸钙沉淀的生成，生成的碳酸钙晶体将会填充在土壤颗粒中间，粘结相邻的土壤颗粒，除了其粘结作用的碳酸钙晶体，还有一部分包裹在砂土颗粒表面或者自由分布在样品中，这也会改变土壤性质（降低土壤孔隙度和渗透性）。本发明解决了目前土壤固化剂的抗压强度低，对土壤孔隙度和渗透性效果差的问题。

主权项

一种生物土壤固化剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：将预处理的巴氏芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别接种至培养液中，混合均匀，培养，得巴氏芽孢杆菌培养液和枯草芽孢杆菌培养液，将两种培养液分别划线接种至然斜面固体培养基中，培养，出现有乳白色菌落，得到两种菌种斜面培养物；取上述两种斜面培养物挑取菌落接种于催化酶发酵液中，置光照培养箱培养，得种子培养基，将种子培养基接种至催化酶发酵培养液中，置于振荡器上振荡培养，得催化酶发酵液；取催化酶发酵液，离心，收集沉淀物A，向沉淀物A中加磷酸缓冲液，破碎处理，间隙处理三次，得处理液，将处理液离心，收集上清液，上清液中加入乙醇，离心，收集沉淀物B，沉淀物B加磷酸缓冲液研磨，离心，弃沉淀，经超滤膜超滤，弃清液，收集截留液，将截留液上CM－纤维素柱，分别用浓度为0.lmol/L和0.2mol/L，pH都为6.8的磷酸缓冲液梯度洗脱，收集酶活力高峰管，将酶活力高峰管装于透析袋，用聚乙二醇脱水浓缩，将浓缩酶液再上DEAE－sephadexA－50层析柱，分别用浓度为0.lmol/L和0.2mol/L，pH都为6.8的磷酸缓冲液梯度洗脱，收集酶活力高峰管，经浓缩后冷冻干燥，得催化酶粉；取上述催化酶粉，加入石英砂和粘结液，进行固化反应，得生物土壤固化剂。