[发明专利]一种用于肺癌驱动基因及易感基因早筛的核酸质谱检测方法

摘要

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种用于肺癌驱动基因及易感基因早筛的核酸质谱检测方法。本发明的检测方法考虑了亚洲人与欧美人群肺癌基因谱的差异性，选择了与亚洲人群罹患肺癌风险显著相关的29个肺癌热点突变和20个单核苷酸多态性位点并进行组合，检测的驱动基因和易感基因更前沿，并纳入了多个与肺癌易感和靶向治疗耐药相关的位点，并且彼此独立，不存在连锁不平衡，因此本发明的位点选择具有代表性、独立性和风险值可积累性，可用于评估个体罹患肺癌的风险；本发明的检测技术价格优势明显，在肺癌早筛检测方面的灵敏度更高，通量更大，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用，可转化研究应用于临床。

主权项

一种用于肺癌驱动基因及易感基因早筛的核酸质谱检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)筛选出可用来评估个体罹患肺癌风险的特异性和敏感性的基因突变位点和易感基因的SNPs位点，并进行位点的组合；(2)设计步骤(1)的用来评估个体罹患肺癌风险的特异性和敏感性的基因突变位点和易感基因的SNPs位点的扩增引物和单碱基延伸引物；(3)将步骤(2)中的扩增引物分为6组，各组中所含的各SNP位点和基因突变位点的上下游引物混合，得到对应的6组扩增引物混合液；(4)对应于步骤(3)中扩增引物分组的方式，将步骤(2)中的单碱基延伸引物分为6组，分别得到6组单碱基延伸引物混合液；(5)以待测样本基因组DNA为模板，对步骤(3)中的6组扩增引物混合液分别进行PCR扩增；(6)虾碱式磷酸酶消化步骤(5)反应体系中剩余的dNTP；(7)利用步骤(6)中各组相对应的单碱基延伸引物对步骤(6)消化后的产物进行单碱基延伸反应，获得延伸产物；(8)脱盐树脂纯化延伸产物；(9)MassARRAY平台检测分析进行芯片点样、扫描，检测结果使用TYPER4.0软件(sequenom)分型并输出结果，通过观察质谱峰变异碱基处是否出峰来判断是否存在突变。