[发明专利]一种毛叶山桐子种胚直接成苗的方法

摘要

本发明公开了一种毛叶山桐子种胚直接成苗的方法，所述方法对种子进行预处理后，解剖种子脱除种皮，获得完整饱满种胚；将获得的种胚诱导为无菌苗，再继代增殖诱导获得丛生苗，然后将丛生苗用无菌接种刀分切开获得单芽苗，单芽苗接种于生根培养基中培养得到生根种苗。本发明获得的毛叶山桐子种苗生长势旺盛、成苗率高，品质高，不易发生退化，且培育时间和循环周期较短，从种胚直播培养至获得生根苗仅需57‑73天，大大节约了效益成本；另外，本发明提供的方法简单易行，各诱导培养基、增殖培养基和生根培养基配方简单、可操作性和可重复性高。本发明成功解决了毛叶山桐子种苗繁育效率低的困难，实现了种苗工厂化生产，市场应用前景较好。

主权项

1.一种毛叶山桐子种胚直接成苗的方法，其特征在于，所述方法对种子进行预处理后，解剖种子脱除种皮，获得完整饱满种胚；将获得的种胚诱导为无菌苗，再继代增殖诱导获得丛生苗，然后将丛生苗用无菌接种刀分切开获得单芽苗，单芽苗接种于生根培养基中培养得到优质且整齐一致的生根种苗；/n所述种子的预处理包括：外植体洗涤与消毒选择健康饱满、无损伤的毛叶山桐子种子为外植体，采用洁净纱布包裹好种子外植体，置入1%w/w洗衣粉溶液中边浸泡边轻轻搓洗种子2-3分钟，以去除表面灰尘和蜡质附着物，然后采用自来水冲洗，转移到无菌滤纸上稍稍吸去表面水分，再置于70%v/v乙醇溶液处理25-30秒，再用0.1%w/w氯化汞溶液浸泡10-15分钟，期间每隔2-3分钟摇动1次；氯化汞溶液消毒结束用无菌水漂洗1-2次后取出，无菌滤纸稍稍吸干表面水分；/n种子二次软化： 将消毒后的种子放入1.5~2.5%v/v过氧化氢溶液浸泡10-15分钟进行种子种皮第一次软化，后用无菌水漂洗1-2次，取出再放入2.0~3.0mol/L氢氧化钠溶液浸泡15-20分钟进行种子种皮第二次软化；第一软化和第二次软化均在4-8℃条件下进行，每隔5-8分钟轻轻摇动1次，软化完成后用无菌水漂洗4-6次后备用；/n所述种胚的获得过程如下：超净工作台中放置无菌体式显微镜，体式显微镜上置无菌解剖盘；将预处理后的种子置于无菌解剖盘上，调整适当的放大倍数，用锋利解剖刀在种子尾端中部轻轻划一下，后用尖头镊子小心往两边轻轻脱除种皮，并注意避免损伤胚根，甄选出乳白色、硬实、带光泽、无病虫症状的完整种胚；/n所述种胚诱导为无菌苗的过程如下：无菌条件下将获得的完整种胚直播于诱导培养基上暗培养7-10天启动培养，诱导幼胚萌发，然后转入光培养培养12-16天获得伸长的完整无菌苗；/n所述种胚诱导为无菌苗的暗培养条件为培养温度23℃-25℃，空气相对湿度30％-60％；光培养条件在暗培养条件基础上附加光照强度1500-2000 lx，光照时间每天12-16小时；所述诱导培养基为WPM基本培养基中添加6-苄基腺嘌呤0.2-0.3毫克/升，萘乙酸 0.05-0.1毫克/升，蔗糖 25-30克/升，琼脂 6.0-6.5克/升，pH值调为5.6-5.8；/n所述无菌苗继代增殖诱导丛生苗的过程如下：无菌条件下将获得的无菌苗用锋利无菌接种刀切成1～1.5cm长、带节的茎段接种到增殖培养基中，在培养温度为23℃-25℃，空气相对湿度30％-60％，光照强度2000-3000 lx，光照时间每天12-16小时的条件下继代增殖培养，培养20-25天可获得大量丛生苗，增殖倍数达4-6倍；所述增殖培养基为WPM基本培养基中添加玉米素0.5-1.0毫克/升，萘乙酸0.2-0.5毫克/升，蔗糖25-30克/升，琼脂6.0-6.5克/升，pH值调为5.6-5.8；/n所述单芽苗生根过程如下：无菌条件下将增殖诱导得到的丛生苗用无菌接种刀将单棵苗分切开获得单芽苗，注意单芽苗茎基部切平，接种于生根培养基中，在培养温度为23℃-25℃，空气相对湿度30％-60％，光照强度2000-3000 lx，光照时间每天12-16小时的条件下进行生根培养，培养18-22天可获得完整有根苗，每株苗生根条数3-6根；所述生根培养基为WPM基本培养基中添加吲哚乙酸0.2-0.3毫克/升，蔗糖25-30克/升，琼脂6.0-6.5克/升，pH值调为5.6-5.8。/n