[发明专利]一种检测乙型脑炎病毒RNA的扩增体系及方法有效
| 申请号： | 201710987761.4 | 申请日： | 2017-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN107513586B | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 陈淑丹;郑伟;吕沁风;郑乐怡;吴忠华;郭利川;汤赛君;王智宏;应清界 | 申请（专利权）人： | 江苏奇天基因生物科技有限公司;浙江国际旅行卫生保健中心（浙江出入境检验检疫局口岸门诊部） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 214000 江苏省无*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学检测领域，公开了一种检测乙型脑炎病毒RNA的扩增体系及方法。所述扩增体系包括以下组分：Tris缓冲液、醋酸镁、氯化钾、二硫苏糖醇、聚乙二醇、ATP、dNTPs、磷酸肌酸、重组酶、单链结合蛋白、UvsY蛋白、核酸外切酶、荧光探针、DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和乙型脑炎病毒特异性引物。将扩增体系与乙型脑炎病毒RNA混合，进行等温扩增，用荧光探针法对扩增产物进行实时检测。本发明提供的方法操作简单，仪器小型化、携带方便，扩增所用时间短，特异性和灵敏度高，适合基层和现场检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 脑炎 病毒 rna 扩增 体系 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测乙型脑炎病毒RNA的扩增体系，包括以下含量的组分：浓度不高于70mM的Tris缓冲液、氯化钾60～160mM、醋酸镁8～30mM、二硫苏糖醇4～9mM、质量体积浓度为4.0～7.3％的聚乙二醇、ATP 5～10mM、dNTPs 0.1～0.4mM、磷酸肌酸20～60μg/μl、单链结合蛋白400～1000ng/μL、重组酶30～400ng/μL、UvsY蛋白50～300ng/μL、核酸外切酶50～200ng/μL、荧光探针50～150nM、DNA聚合酶60～150ng/μL、逆转录酶5～40U、RNA酶抑制剂20～60U、正向引物100～500nM和反向引物100～500nM；其中，所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示；所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；所述荧光探针序列如SEQ ID NO.3所示。
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