[发明专利]一种卷烟烟气对细胞水渗透性影响的检测方法

摘要

本发明涉一种卷烟烟气对细胞水渗透性影响的检测方法，属于生物应用技术领域。本发明采用生物化学及细胞学方法，利用BMP6处理细胞，模拟了干燥综合症发生时的细胞微环境，从而研究卷烟烟气对水渗透性的影响，相较于动物实验而言更为简单、高效；在卷烟烟气的捕集上采用了口腔仿生模拟装置，更贴合实际的人抽吸状态；同时采用了高内涵系统，可在不同时间点同时检测多个样品对细胞水渗透性的影响，可快速准确可视的进行多样品检测，为卷烟烟气的功效性评价提供了一个新的快速手段。

主权项

一种卷烟烟气对细胞水渗透性影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），采用专利申请号为201520354840.8的一种用于研究主流烟气暴露于口腔中的仿生吸收装置，采用DMEM/F12细胞培养基浸润该装置的模拟人工口腔黏膜内壁；选取10‑20支重量和吸阻一致的烟支作为待检测样品，平衡后进行抽吸，抽吸结束后，取出仿生吸收装置的瓶体中的液体，得到仿生抽吸液体；步骤（2），将涎腺腺样囊性癌细胞经0.25%胰酶消化后，以2‑4×104个/mL细胞浓度接种于含有DMEM/F12细胞培养基的细胞培养板上，在37℃、5%CO2的条件下培养22‑26h后，加入骨形成蛋白6至终浓度为6ng/ml，处理2‑3d；步骤（3），移去步骤（2）中的培养上清，以步骤（1）得到的仿生抽吸液体稀释4‑8倍后的液体作为培养基继续在37℃、5%CO2的条件下对细胞进行培养22‑26h；步骤（4），培养结束后弃上清，加入含10μM荧光钙黄绿素的DMEM/F12细胞培养基，室温孵育9‑11min；步骤（5），弃上清，将细胞置于150 mOsm低渗液中进行处理9‑11min，再换成等渗液，用高内涵成像系统对细胞进行FTIC通道的扫描，设置为每5‑10s扫描一次，扫描多次；步骤（6），使用高内涵分析软件对步骤（5）所得到的图片进行分析，计算不同时间点扫描图片的平均细胞荧光面积；之后按以下公式计算调节性容积回缩值RVD：RVD(%)=（Vmax‑ Vmin）÷（Vmax‑V0）×100   式（Ⅰ）式（Ⅰ）中，V0为等渗状态下平均细胞荧光面积；Vmax为低渗状态下最大平均细胞荧光面积；Vmin为低渗状态下平均细胞荧光面积；所得到的调节性容积回缩值即表征该检测样品烟气对细胞水渗透性。