[发明专利]一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法

摘要

本发明涉及一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，属于生物检测技术领域。该方法首先采集志愿者的唾液，并针对胶基型产品的使用特点，采用全仿真模拟咀嚼机来模拟胶基型烟草制品的咀嚼过程，不仅考虑了制品溶出物与唾液中细菌的相互作用，还充分模拟了咀嚼过程胶基型制品对细菌的粘附作用，从而使整个变化过程更接近于人的咀嚼，之后对咀嚼过程中唾液中总细菌含量进行荧光定量PCR分析，从而考察在使用胶基型烟草制品前后唾液中的总细菌含量的变化，为胶基型烟草制品的口腔健康提供参考。

主权项

一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），采集健康志愿者唾液，编号为1#液体；步骤（2），将胶基型烟草制品放入模拟咀嚼机中，并分多次注入步骤（1）采集到的唾液，进行人工咀嚼，咀嚼过程中，收集不同咀嚼时间点的唾液；步骤（3），将步骤（2）收集到的不同咀嚼时间点的唾液与采集到的唾液一起放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养；之后分别提取各时间点的培养液中唾液总细菌DNA，同时提取多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA；步骤（4），以浓度梯度稀释10倍的多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，之后绘制荧光定量PCR标准曲线；同时，分别以各时间点的培养液中唾液总细菌DNA作为模版进行荧光定量PCR分析，空白对照模板采用灭菌双蒸水，根据标准曲线计算各时间点培养液中唾液总细菌含量；其中，荧光定量PCR反应所使用的上游引物为5’‑ cgctagtaatcgtggatcagaatg‑3’；下游引物为5’‑tgtgacgggcggtgtgta‑3’；探针为FAM‑cacggtgaatacgttcccgggc‑TAMRA。