[发明专利]一种快速提取果实果肉中细胞壁酸性转化酶的方法

摘要

本发明公开了一种快速提取果实果肉中细胞壁酸性转化酶的方法。以果实果肉为原料，经液氮研磨后加入预冷的提取缓冲液，离心后得到的沉淀采用洗涤液多次反复洗涤，去除可溶性蛋白质，再将洗涤后得到的沉淀中加入洗脱液，进行超声波处理，并保持整个超声处理过程中水浴温度0～4℃。超声处理结束后，离心获得的上清液即为细胞壁酸性转化酶的粗酶提取液。本发明提取所得提取液中细胞壁酸性转化酶的活性与常规24 h振荡提取出的细胞壁酸性转化酶的活性无显著差异性，且该方法简便、快速、低耗，适合各种果实中细胞壁酸性转化酶的提取，所得提取液可用于细胞壁酸性转化酶活性分析。

主权项

一种快速提取果实果肉中细胞壁酸性转化酶的方法，其特征在于，在温度为0～4℃的条件下，包括如下步骤：（1）分别配制提取缓冲液Ⅰ,Ⅱ和洗脱缓冲液：提取缓冲液Ⅰ为150 mm Tris‑HCl pH 8.0 ，10 mm MgCl2，2 mm EDTA，0.1 mm PMSF，0.2% v/v β‑巯基乙醇，1 mm 苯甲脒，3% w/v PVPP 和10 mm 抗坏血酸；提取缓冲液Ⅱ为150 mm Tris‑HCl pH 8.0，10 mm MgCl2，2 mm EDTA，0.1 mm PMSF，0.2% v/v β‑巯基乙醇，1 mm 苯甲脒， 10 mm 抗坏血酸；洗脱缓冲液为150 mm Tris‑HCl pH 8.0 ，0.5 m NaCl，10 mm MgCl2，2 mm EDTA，0.1 mm PMSF，0.2% v/v β‑巯基乙醇，1 mm 苯甲脒， 10 mm 抗坏血酸；（2）将果实果肉样品研磨后，加入提取缓冲液Ⅰ，经冷冻离心处理，去除上清液，获得沉淀；（3）用提取缓冲液Ⅱ反复洗涤沉淀，去除蛋白质；（4）将洗脱缓冲液加入到步骤（3）获得的沉淀中，在超声波频率为40KHZ，功率为100W的条件下，超声提取2～3 h，再经离心处理后得到的上清液即为果实果肉中细胞壁转化酶的粗酶提取液。