[发明专利]一种肺癌EGFRL858R和19Del的ddPCR检测方法及应用

摘要

本发明涉及医学和生物技术领域，具体涉及一种肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR检测方法及应用，检测方法包括对外周血的血细胞和血浆分离、采用两步纯化法进行cfDNA的提取、针对肺癌相关的EGFR L858R位点和EGFR 19号外显子缺失位点分别设计2个探针和1对引物、以提取的cfDNA为模板进行ddPCR检测、最后对获得的扩增产物进行数据分析，获得EGFR敏感性突变L858R和19Del的比例；应用包括在肿瘤患者治疗中的应用，在肺癌晚期治疗过程中，针对肺癌患者提供用药相关基因位点突变信息，为肺癌个体化精准用药指导、药效评估以及疗效监测提供了重要的参考依据。

主权项

一种肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提供肺癌患者外周血样本，对所提供的外周血样本进行血细胞和血浆分离；(2)对分离获得的血浆样本采用两步纯化法进行cfDNA的提取，获得cfDNA提取物；(3)针对肺癌相关的EGFR L858R位点设计2个探针如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示、和1对引物如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；针对肺癌相关的EGFR 19号外显子缺失位点设计2个探针如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示、和1对引物如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；(4)以提取的cfDNA为模板，进行ddPCR检测，获得含有敏感性突变位点的扩增产物；(5)对获得的扩增产物进行数据分析，获得EGFR敏感性突变L858R和19Del的比例。