[发明专利]一种基于大分子自组装制备糖蛋白印迹荧光纳米粒子的方法

摘要

本发明公开了一种基于大分子自组装制备糖蛋白印迹荧光纳米粒子的方法，涉及高分子材料科学、生命健康、自组装等科技领域。本发明首先制备了可光交联的含荧光单元乙烯基咔唑、亲水单体及含硼酸识别单元的无规双亲共聚物，然后在水的诱导下和光引发剂、交联剂共组装形成纳米粒子，在组装过程中，糖蛋白通过与硼酸之间的共价结合被包裹进纳米粒子内部，利用光交联技术稳定其结构，调节pH将糖蛋白洗脱后得到的纳米粒子可用于水相中对糖蛋白的特异性识别与检测。该发明结合了纳米材料比表面积大、分子印迹材料选择性好、硼酸‑糖蛋白的共价结合和荧光检测技术灵敏性高等优点，可以对实际样品中低丰度的糖蛋白进行选择性的高灵敏快速检测，尤其在临床诊断及疗效评价中糖蛋白的微量检测有着重要意义。

主权项

1.一种基于大分子自组装制备糖蛋白印迹荧光纳米粒子的方法，其特征在于具体步骤如下：第一步：含硼酸基元的可光交联双亲无规共聚物的制备将荧光单体乙烯基咔唑(NVC)、亲水单体、识别单元及引发剂溶解在溶剂中，通N₂除去体系中的氧气，将反应体系移入油浴中，在60～100℃下搅拌，反应8～24h；亲水单体是丙烯酸、甲基丙烯酸中的一种，识别单元是3‑乙烯基苯硼酸、4‑乙烯基苯硼酸、甲基丙烯酸苯硼酸酯中的一种，乙烯基咔唑与亲水单体的摩尔比为1:5～1:1，乙烯基咔唑与识别单元的摩尔比为1：0.1～1：0.05；然后，向反应溶液中加入甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)、三苯基膦和对苯二酚的混合溶液，在80～120℃下反应8～24h，通过沉淀，真空烘箱干燥过夜得到含苯硼酸可光交联双亲无规共聚物，其分子量在5000～20000；亲水单体和甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为2：1～1：3，三苯基膦和甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为0.02：1～0.06：1，对苯二酚和甲基丙烯酸缩水甘油酯的摩尔比为0.005：1～0.015：1；第二步：糖蛋白印迹荧光纳米粒子的制备将第一步所得到的含硼酸基元可光交联双亲无规共聚物溶解在溶剂中，并向其中加入交联剂和光引发剂，向上述混合溶液中滴加糖蛋白水溶液诱导含硼酸基元可光交联双亲无规共聚物与糖蛋白、交联剂及光引发剂共组装得到纳米粒子，将上述纳米粒子置于紫外点光源下照射15～30min，再将其反滴定入5～10倍体积的水中，搅拌过夜；可光交联双亲无规共聚物的浓度为3～10mg mL^‑1，糖蛋白水溶液的浓度为0.05～0.6mg mL^‑1，糖蛋白与含硼酸基元可光交联双亲无规共聚物的摩尔比为1：100～1：50，含硼酸基元可光交联双亲无规共聚物与交联剂的摩尔比为30：1～50：1，含硼酸基元可光交联双亲无规共聚物与光引发剂的摩尔比为100：1～80：1；第三步：模板分子的洗脱向上述水分散液中加入醋酸，洗脱30～60min，离心，再用洗脱液对其进行洗涤，直至上层清液中没有糖蛋白的紫外吸收，将离心所得沉淀重新分散于水中得到悬浮液，调节pH使得其由悬浮液变为澄清透明的分散液，分散液的pH为5～12，其可用于对水相中相应糖蛋白的识别与检测。