[发明专利]树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法及鉴定方法

摘要

本发明公开了树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法，树突状细胞子集CD103+DC为小鼠骨髓源CD103+DC，包括以下步骤1)配制含有FLT3L、GM‑CSF、FBS和双抗的RPMI‑1640培养基；2)培养小鼠骨髓源细胞小鼠处死浸泡；用DPBS冲洗小鼠胫骨、腓骨腔，离心弃上清；加红细胞裂解液，离心弃上清；加DPBS悬浮细胞，过滤，滤液离心弃上清；加完全培养基培养；第5d，加完全培养基继续培养；第9d收集细胞，离心；加完全培养基重悬，至第15d，加100ng/mL LPS处理24h后收获细胞。本发明的有益效果为本发明提供的树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法及鉴定方法，CD103+DC在维持肠黏膜免疫与免疫耐受平衡中起着重要作用，建立一种CD103+DC稳定的体外培养方法，对研究CD103+DC起源、生物学特征、治疗应用具有重要意义。

主权项

树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法，其特征在于，所述树突状细胞子集CD103+DC为小鼠骨髓源CD103+DC，体外培养方法包括以下步骤：1)配制完全培养基：完全培养基是由含有FLT3L、GM‑CSF、FBS和双抗的RPMI‑1640培养基配制而成，其中FLT3L的含量为200ng/mL，GM‑CSF的含量为10ng/mL，FBS的含量按照质量百分比计为10％，双抗的含量按照质量百分比计为1％；2)小鼠骨髓源细胞的培养：取6‑8周龄C57BL/6小鼠，脱颈处死，置于75％酒精中浸泡30min；用DPBS冲洗小鼠胫骨、腓骨腔以获得骨髓源细胞，获得的骨髓源细胞以离心力300g离心5min，弃上清；加入3倍体积的红细胞裂解液作用2min，以离心力300g离心5min，弃上清；加入DPBS悬浮细胞，用细胞筛过滤，滤液以离心力300g离心5min，弃上清；加入一定体积的完全培养基悬浮细胞，使细胞浓度最终为1.5×107个/mL，并移至6孔板中培养；培养至第5d，每孔加入1/2体积的完全培养基，继续培养；于第9d收集细胞，以离心力300g离心5min；加入完全培养基重悬，继续培养至第15d，收获细胞。