[发明专利]一种改良的肝癌转移细胞胞体和突出的分离方法

摘要

一种改良的肝癌转移细胞胞体和突出的分离方法，利用Boyden小室分离肝癌转移细胞的突出与胞体，从亚细胞结构出发，运用改良的Boyden小室法分离肝癌转移细胞胞体和突出，利用Western‑blot、RNA染色、免疫荧光等技术验证分离结果。可于研究在HCCLM3 肝癌细胞胞体与突出中差异表达的情况、筛选出与HCC浸润转移过程有关的微小RNA，为后续HCC肿瘤生物标记物的研究、相关临床诊疗提供新的思路。

主权项

一种改良的肝癌转移细胞胞体和突出的分离方法，其特征在于，所述的肝癌转移细胞胞体和突出的分离方法采用Boyden 皿法分离突出和细胞体，具体步骤如下：（1）将六孔型 1.0μm 孔径的悬挂式细胞培养皿放入到浓度为 10μg/mL I型胶原蛋白中37℃恒温静置2小时；（2）接着把孵有 I 型胶原蛋白的悬挂式细胞培养皿转移到不含I型胶原蛋白溶液的六孔板空中，并置于4℃条件下过夜处理；（3）然后把肝癌细胞接种到孵有I型胶原蛋白的1.0μm 孔径悬挂式细胞培养皿上，37℃静置 24~30小时；（4）分离细胞突出：先用1×PBS 洗涤，倒立悬挂式细胞培养皿，用移液枪吸去悬挂式细胞培养皿上侧的残留培养基，接着用浸有总RNA抽提试剂Trizol的细胞刮铲来搜刮悬挂式细胞培养皿上侧的细胞突出；（5）分离细胞体 RNA：当分离细胞体中的RNA时，平放悬挂式细胞培养皿，用移液枪吸去悬挂式细胞培养皿里的培养基，然后用浸有总RNA抽提试剂Trizol的细胞刮铲来搜刮悬挂式细胞培养皿内侧的细胞体。