[发明专利]一种使用一次性袋子进行狂犬病毒灭活、灭活剂水解的装置及方法

摘要

本发明提供一种使用一次性袋子进行狂犬病毒灭活、灭活剂水解的装置及方法，其中灭活一次性袋子，开设有三个连接口，上部为充气口，连接充气组，底部分别为液体入口和液体出口，分别连接充液组和排液组，袋子中央设有内置搅拌器；其中充气组由囊式滤器、硅胶管、管道夹组成，囊式滤器外包裹有无菌袋；充液组分别由连接头B、硅胶管、管道夹、三通及EZD阀门依次连接，三通的另一开口连接硅胶管、管道夹及连接头A；优点为：对一次性袋子进行了改造及合理使用，使病毒液的灭活/水解方法得到了改进，降低了病毒灭活失败风险、减少了抗原损失，降低了生产成本。

主权项

1.一种使用一次性袋子进行狂犬病毒灭活、灭活剂水解方法，包括灭活一次性袋子（10）、水解一次性袋子（20）及硅胶管，其特征在于：灭活一次性袋子（10）开设有三个连接口，上部为充气口A（6），连接充气组A（1），底部分别为液体入口（11）和液体出口（13），分别连接充液组（2）和排液组（3），袋子中央设有内置搅拌器A（9）；其中充气组A（1）由囊式滤器A（7）、硅胶管A（5）、管道夹A（4）组成，囊式滤器A（7）外包裹有无菌袋；充液组（2）分别由连接头B（12）、硅胶管、管道夹、三通及EZD阀门A（8）依次连接，三通的另一开口连接硅胶管、管道夹及连接头A（14）；排液组（3）由连接头C（17）、硅胶管及EZD阀门B（15）依次连接；水解一次性袋子（20），开设有四个连接口，上部分别为连接充气组B（18）的充气口B（19）和连接灭活一次性袋子（10）液体出口（13）的进液口（24），底部分别为出液口（26）和温度探头连接口（25），袋子中央设有内置搅拌器B；其中充气组B（18）由囊式滤器B、硅胶管、管道夹组成，囊式滤器B外包裹有无菌袋；进液口（24）通过进液组（22）与灭活一次性袋子（10）液体出口（13）连接，进液组（22）分别由连接头D（23）、硅胶管、管道夹、三通及EZD阀门C依次连接，三通的另一开口连接硅胶管、管道夹及连接头E（21）；出液口（26）连接出液组（27），出液组（27）由连接头F（16）、硅胶管及EZD阀门D依次连接；所述方法包括以下步骤：①将生产细胞的复苏、传代，然后将传代的生产细胞置于微载体生物反应器中扩增培养；②向微载体生物反应器中加入处理液，调整微载体生物反应器的灌流速度为0，清洗生产细胞表面，在清洗后的生产细胞上接种狂犬病病毒固定毒株；③收获病毒液，进行过滤澄清，超滤浓缩；④病毒浓缩液灭活：从灭活一次性袋子（10）的顶部通过充气组A（1）进行预充气，病毒浓缩液由连接头A（14）口进入，灭活剂由连接头B（12）进入，用PBS溶液由连接头B（12）口进行顶洗，关闭EZD阀门A（8），置于2‑8℃冷库中，持续搅拌灭活24h；⑤病毒灭活液的转移：从水解一次性袋子（20）的顶部通过充气组B（18）进行预充气，然后置于具有TCU控温系统的水浴套筒中，将装有灭活病毒液的灭活一次性袋子（10）的连接头C（17）与水解一次性袋子（20）的连接头E（21）口相连接，进行病毒液的转移；⑥水解去除灭活剂： 37℃水浴加热2h以使灭活剂完全水解，将NaOH溶液由连接头D（23）进入水解一次性袋子（20），以调节病毒灭活液pH至7.4‑7.8，水解后的病毒灭活液由连接头F（16）排出；所述生产细胞为Vero细胞、人二倍体细胞、地鼠肾细胞、鸡胚细胞、鸭胚细胞中的任一项，所述狂犬病病毒固定毒株为PV株、巴斯德株、Pitman‑Moore、CVS、Flury LEP、Flury HEP、Kelev、ERA株中的任一株；所述灭活剂水解时所用的水浴装置是TCU控温，冷媒/热媒双向控制；所述病毒液的澄清方法是将狂犬病毒收获液经过0.8μm和0.65μm的过滤器进行澄清；所述病毒液的浓缩方法是将澄清后的狂犬病病毒收获液使用300KD或750KD的超滤膜包或中空纤维柱进行超滤浓缩，浓缩倍数为20‑30倍；所用的灭活剂为β‑丙内酯，先将β‑丙内酯用注射用水1:40倍稀释，再以体积比1:100添加到病毒浓缩液中；所述步骤④搅拌条件为2‑8℃下，150‑180rpm，持续搅拌24h。