[发明专利]一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法

摘要

本发明涉及一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法，包含口腔拭子DNA的提取方法以及口腔拭子DNA的保存液的制备方法，本发明提供的常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法，同时考虑了提取以及保存液的制备两点，从而有利于保持DNA的完整性。在这过程中精化了各个参数值，保存的效率高于其他方法，而同时在常温下很大的时间跨度下进行保存。总的说来，本方法具有快速、简便、经济、可靠的特点，可以用于多态性的分析。

主权项

一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法，其特征在于，包含：口腔拭子DNA的提取方法以及口腔拭子DNA的保存液的制备方法；所述口腔拭子DNA的提取方法包含以下步骤：第一步，取一个2ml容量的离心管，对其进行高温消毒，选取口腔拭子，使用消毒灭菌后的镊子小心撕去其外表面，选取的过程中用分析天平称取保证所述口腔拭子的质量在0.8g与1g之间，只取所述口腔拭子头部的五分之一到四分之一之间，放入离心管中，加入质量百分比为10％的弱阳离子螯合树脂溶液，反复吹打，加入浓度为100μl 4mol/L异硫氰酸胍配成的细胞裂解液(PH＝10.0)、和100μl 80U/ul的木瓜蛋白酶溶液，将两者震荡混匀后剧烈振荡后，室温下放置1分钟，再使用台式高速离心机13000rpm离心1分钟；第二步，将pH为5.0的磷酸缓冲溶液与上清液按体积比4：1混合，加入800μL无水乙醇，室温下静置1分钟，加入核酸纯化柱中，台式高速离心机13000rpm离心1分钟；在所述核酸纯化柱中加入500g/L无水乙醇洗涤液8000μL混匀后使用台式高速离心机8000rpm离心1分钟，将离心后的所述核酸纯化柱转移到另一个干净的离心管，再次加入400μL的同样的洗涤液使用相同的手法离心1分钟，将干燥待用的所述核酸纯化柱置于新离心管上，将80μL 40‑50℃的去离子水升温至70℃，放置于所述核酸纯化柱的硅胶膜上，并在恒温50℃下放置1分钟，并立即离心1分钟，再取一个消毒后的离心管，并收集下层液体，得到口腔拭子DNA溶液；所述口腔拭子DNA的保存液的制备方法，步骤如下：首先，取50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液与30ml 0.1mol/L盐酸在一个干净的200ml的烧杯中混匀后，加去离子水稀释至100ml，得到稀释后的三羟甲基氨基甲烷溶液，将十二烷基硫酸钠也溶解于烧杯中，加入灭菌去离子水、0.85％乙醇直到达到饱和状态，并添加乙二胺四乙酸、蔗糖分别到达浓度20mol/L、28mol/L，得到饱和溶液，然后将所述饱和溶液用冰乙酸调节至pH 5.0配制成保存液；将所述口腔拭子DNA加入所述保存液中进行常温保存，保存的温度在0℃到30℃之间。