[发明专利]一种双链核酸片段加接头的方法、文库构建方法和试剂盒

摘要

本申请公开了一种双链核酸片段加接头的方法、文库构建方法和试剂盒。本申请双链核酸片段加接头的方法，在双链靶标核酸片段3’末端连接3’端侧向接头；双链靶标核酸片段包含连接位点，连接位点包含3’‑羟基的3’末端，连接位点为切口、缺口或5’端突起；3’端侧向接头包含5’‑磷酸的5’平端和非连接性3’末端；连接3’端侧向接头方法包括，采用连接酶将双链靶标核酸片段和3’端侧向接头连接。本申请的方法，在双链靶标核酸片段3’末端连接3’端侧向接头，基于该方法进行文库构建，应用于cPAL和合成测序，适于基因组序列或全外显子测序，减小了建库核酸起始量，简化了建库流程，改善了GC富含区测序覆盖率，提高了测序能力。

主权项

1.一种双链核酸片段加接头的方法，其特征在于：在双链靶标核酸片段的3’末端连接3’端侧向接头；所述双链靶标核酸片段包含连接位点，所述连接位点具有包含3’-羟基的3’末端，所述连接位点为单链缺刻产生的切口、单链核苷酸缺失产生的缺口或5’端突起；所述3’端侧向接头具有包含5’-磷酸的5’平端，以及非连接性的3’末端；所述连接3’端侧向接头的方法包括，采用连接酶，在连接反应条件下，使双链靶标核酸片段的连接位点的3’-羟基，与3’端侧向接头的5’平端的5’-磷酸发生连接反应，将双链靶标核酸片段与3’端侧向接头连接。