[发明专利]一种白菜瞬时转化的方法

摘要

本发明公开了一种白菜瞬时转化的方法。本发明的方法包括如下步骤：将目的基因导入农杆菌中，得到重组菌；用重组菌侵染白菜外植体，实现白菜的瞬时转化；目的基因通过重组载体导入农杆菌中；重组载体中用于启动目的基因表达的启动子为甘露醇合成酶启动子；用重组菌侵染白菜外植体的方法包括如下步骤：将OD₆₀₀为0.1的重组菌与OD₆₀₀为0.2的p19菌液混匀，得到混合菌液；用混合菌液侵染白菜子叶。本发明在烟草农杆菌注射方法的基础之上，对注射部位，注射农杆菌浓度，注射载体等方面进行调整，建立了适用于白菜的农杆菌注射渗透介导的瞬时表达体系。通过实验证明：本发明的方法可成功实现白菜瞬时转化，且有较高的转化效率。

主权项

1.一种白菜瞬时转化方法，包括如下步骤：将目的基因导入农杆菌中，得到重组菌；用所述重组菌侵染白菜外植体，实现白菜的瞬时转化；所述白菜外植体为白菜子叶；所述目的基因通过重组载体导入农杆菌中；所述重组载体是将目的基因克隆至表达载体的多克隆位点得到的载体；所述表达载体为pCambia 1300载体；所述重组载体中用于启动目的基因表达的启动子为甘露醇合成酶启动子；所述甘露醇合成酶启动子的核苷酸序列为序列表中的序列2；用所述重组菌侵染白菜外植体的方法包括如下步骤：将OD600为0.2的所述重组菌与OD600为0.1的p19菌液混匀，得到混合菌液；用所述混合菌液侵染白菜子叶；所述侵染的方法为注射；所述p19菌液为将p19质粒转化到农杆菌菌株GV3101中得到；所述OD600为0.2的所述重组菌与所述OD600为0.1的p19菌液等体积混匀；所述侵染后还包括将所述白菜置于如下条件下进行培养的步骤：25℃条件下光照16小时，20℃条件下黑暗8小时，湿度50‑60%。