[发明专利]一种聚乙二醇修饰的纳米氧化石墨烯给药系统的制备方法

摘要

本发明提供一种聚乙二醇修饰的纳米氧化石墨烯给药系统的制备方法，属于生物技术与医药领域。步骤如下：首先，在碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺的催化作用下，将甲氧基聚乙二醇羧基的羧基与阿霉素的氨基进行接枝，得到接枝产物聚乙二醇‑酰胺‑阿霉素PEG‑ami‑DOX。然后，利用阿霉素与纳米氧化石墨烯的π‑π共轭作用，将PEG‑ami‑DOX通过非共价键结合到纳米氧化石墨烯的表面上，将PEG间接的锚定在NGO上，得到复合药物PEG‑ami‑DOX/NGO。本发明的反应条件温和，步骤简单，不需要对NGO进行化学修饰，仅需要简单的物理修饰，药物载体的载药量大于100％，具有良好的应用前景。

主权项

一种新型聚乙二醇修饰的纳米氧化石墨烯给药系统的制备方法，其特征在于以下步骤：(1)聚乙二醇接枝阿霉素制备聚乙二醇‑酰胺‑阿霉素PEG‑ami‑DOX室温下将不同分子量的反应物甲氧基聚乙二醇羧基PEG‑COOH与碳二亚胺盐酸盐EDCI、N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶于N,N‑二甲基甲酰胺DMF中，超声使其完全溶解，搅拌反应0.5～1.5h得到反应液；将DOX加入DMF溶液中，并且缓慢加入三乙胺TEA；将该溶液加入上述反应液中，室温避光搅拌反应后，将反应液装在透析袋中，并在蒸馏水中进行透析，将透析液取出冷冻干燥，即可得到目标产物PEG‑ami‑DOX；所述的PEG‑COOH与EDCI物质的量比分别为1：1.5～2.5；所述的PEG‑COOH与NHS的物质的量比1：2.5～3.5；所述的PEG‑COOH与DOX的物质的量之比为1：1～2；所述的TEA与DOX的物质的量之比为1:0.5～2；所述的PEG‑COOH在DMF溶液中的浓度范围为10～20mg/mL；所述的DOX在DMF溶液中的浓度范围为0.5～3mol/L；(2)通过改进的Hummer’s方法制备纳米氧化石墨烯NGO室温下，将多层氧化石墨烯加入反应容器中，再向其中加入浓H2SO4，每10mL浓H2SO4中加入0.4～0.5g的多层氧化石墨烯，搅拌使二者充分混合；将反应容器置于冰水浴中继续搅拌，待反应容器中的混合液温度降到10℃以下后，缓慢向体系中加入高锰酸钾固体，高锰酸钾固体添加过程中控制反应体系的温度为0～20℃，加入完毕后，继续在冰水浴中搅拌05～1.0h；将反应体系升温至32～38℃再反应1.5～2.5h；第一次加入去离子水后，将反应体系移入温度为90～105℃的油浴中，反应1～2h；第二次加入去离子水，待温度恒定后，超声1h，加入过氧化氢溶液，充分搅拌，反应液变为亮黄色后，继续反应20～40min；加入NaOH溶液调节反应体系的pH至6.5～7；最后在纯水中透析纯化样品，冷冻干燥后得到粉末状的纳米氧化石墨烯；所述的多层氧化石墨烯与高锰酸钾的质量比为1:2.5～3.5；(3)制备负载阿霉素DOX的纳米氧化石墨烯DOX/NGO室温下，将DOX水溶液与NGO水溶液按3：1的质量比混合后，超声处理后，避光搅拌12～16h；混合液于8000～13000r/min下高速离心5～15min，反复进行离心水洗，除去游离的盐酸阿霉素，并将下层沉淀重新溶于水中，即得到负载阿霉素的纳米氧化石墨烯DOX/NGO；(4)以纳米氧化石墨烯为载体，负载接枝阿霉素的聚乙二醇制备得到新型复合药物PEG‑ami‑DOX/NGO将PEG‑ami‑DOX溶液与NGO水溶液混合，并避光搅拌24～48h后，8000～13000r/min下高速离心5～15min，反复进行离心水洗，除去未被负载的PEG‑ami‑DOX，并将下层沉淀重新溶于水中，制备得到PEG‑ami‑DOX/NGO。