[发明专利]一种矾根品种“黑曜石”组织培养繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种矾根品种“黑曜石”组织培养繁殖的方法，该方法包括以下步骤：（1）选取外植体并进行消毒；（2）将处理后的花序轴切割后，进行愈伤组织诱导培养；（3）将愈伤组织进行分化诱导不定芽；（4）将不定芽继代增殖培养成苗；（5）对继代增殖培养后的试管苗进行生根培养；（6）炼苗培养。采用该繁殖方法对矾根品种“黑曜石”进行组织培养，一个继代周期（35d）不定芽增殖率为10倍以上，繁殖速度快，有效解决了种苗繁殖的难题。

主权项

1.一种矾根品种“黑曜石”组织培养繁殖的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）外植体的选取与消毒：选取生长20d左右的花序轴作为外植体，冲洗干净后，进行消毒，消毒过程为：用清水冲洗干净，然后用安利洗涤剂漂洗一次，摇床上振荡15‑20min；流水冲洗20‑30min后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒10‑20s，立即倒入0.1％的升汞消毒12min，最后用无菌水洗涤4次，每次振荡3‑5min，将消毒完毕的花序轴切割为2cm长的小段；（2）愈伤组织的诱导：取步骤（1）中处理得到的外植体小段，以斜面放置方式接种于诱导培养基（事先将培养基倒斜面）中进行愈伤组织的诱导，培养温度为25±2℃，首先在黑暗中培养10d，然后进行光照培养25d；所述光照培养条件为：光照时间为14h/d，光照强度为1500lx；所述诱导培养基为MS+6‑BA0.6mg/L+IBA0.02mg/L，pH值为5.8‑6.0；（3）愈伤组织的分化：将步骤（2）中诱导得到的愈伤组织，诱导35d后，在外植体上切下，接入分化培养基进行不定芽分化，培养温度为25±2℃；光照时间14h/d，光照强度2500lx；所述诱导培养基为N6+CPPU 0.3mg/L+IBA0.01mg/L，pH值为5.8‑6.0；（4）不定芽的继代增殖：将诱导得到的不定芽切割后，每芽带0.3cm左右茎段和3‑4片叶片，接入继代增殖培养基中进行继代培养25d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为2500lx；所述继代增殖培养基为MS＋6‑BA0.2mg/L，pH值为5.8‑6.0；（5）根的诱导：将步骤（3）中继代增殖得到的试管苗接入生根培养基中进行生根培养15d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为2000lx；所述生根培养基为MS+2.0mg/L IBA，pH值为5.8‑6.0；待不定根长满瓶底，植株整体生长稳健时，可准备移苗出瓶；(6) 将培养瓶的瓶盖打开，炼苗2‑3天，移栽入扦插基质中，所述扦插基质优选为：按照2：2：1的体积比例将泥炭土、蛭石和珍珠岩混匀，地上部分喷洒0.1％的多菌灵，每天喷水2次，保证湿度，避免阳光直射。