[发明专利]一种通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法

摘要

本发明涉及植物生物技术领域，具体是一种通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法。本发明还提供一种用于上述花药培养方法的改良的壮苗生根培养基。本发明通过确定簇毛麦取材关键时期从源头有效提高了分离花药活力和诱导反应，同时通过壮苗、炼苗关键措施解决了再生苗生长孱弱的问题；本发明建立了一套适合簇毛麦的简单、快速、稳定的花药离体再生体系，利用本发明程序可在半年内获得簇毛麦纯合再生植株种子，能有效避免了因簇毛麦异花授粉带来的杂合问题；有利于提高簇毛麦遗传图谱和基因组测序的研究，同时能提高小麦远缘杂交种的花药培养效率，加速簇毛麦野生优良基因资源在小麦遗传改良中的应用。

主权项

一种通过花药培养获得簇毛麦纯合再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：A)选取小孢子发育处于单核早‑中期的幼穗，4‑7℃低温预处理3‑21d；B)步骤A中预处理后的簇毛麦幼穗用10‑15％NaClO处理10‑15min，无菌水冲洗后釆取花药置于含甘露醇50‑70g/L，添加1.0‑1.2g/L CaCl2、0.9‑1.0g/L MES和0‑30mg/L秋水仙碱，pH 5.5‑6.0的提取液中24‑26℃，暗处理2天；换入添加麦芽糖75‑105g/L、谷氨酰胺1000‑2000mg/L、水解酪蛋白100‑600mg/L、10‑30mg/L脯氨酸、KT 0.5‑1.5mg/L、2,4‑D 0.5‑2.0mg/L，pH5.5‑6.0的N6诱导培养基中培养，诱导愈伤组织形成；C)步骤B中的愈伤组织转入添加20‑40g/L麦芽糖、0.5‑1.5mg/L 6‑BA、1.0‑3.0mg/L KT、0‑0.1mg/L NAA、4‑6g/L琼脂粉，pH 5.5‑6.0的2/3MS分化培养基中培养；待再生芽长至2‑4cm时，转入添加蔗糖20‑40g/L、谷胱甘肽0‑200mg/L、NAA0.05‑1.0mg/L、矮壮素0.3‑6mg/L、4‑6g/L琼脂粉，pH 5.5‑6.0的1/2MS壮苗生根培养基中培养，获取根、茎、叶完整的再生植株。